[發(fā)明專(zhuān)利]高效便捷提取水稻DNA的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201711498735.1 | 申請(qǐng)日： | 2017-12-30 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN108531546A | 公開(kāi)（公告）日： | 2018-09-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉佳音;張國(guó)棟;邵曉宇;鄒丹丹;張繼雨;張佩;王晶;米鐵柱 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 青島袁策生物科技有限公司 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12Q1/6806 | 分類(lèi)號(hào)： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京華仁聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11588 | 代理人： | 李冰 |
| 地址： | 266000 山東省*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 水稻DNA 緩沖液 放入 新鮮葉片 模板DNA 打孔器 封板膜 提取液 混勻 加樣 加熱 取出 申請(qǐng) | ||
本申請(qǐng)公開(kāi)了一種高效便捷提取水稻DNA的方法，包括如下步驟：(1)將200μL96孔PCR板置于冰上，用打孔器分別取2片新鮮葉片放入PCR板上；(2)每孔加入70μL緩沖液A，用封板膜封好，立刻將平板放入PCR儀中加熱到95℃，保持10min；(3)取出平板，迅速加入等體積的緩沖液B，混勻。步驟(3)中的提取液1μL能夠直接作為模板DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)。本發(fā)明方法利用PCR板高效便捷提取水稻DNA，并縮短PCR加樣時(shí)間。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及一種利用PCR板高效便捷提取水稻DNA的方法。
背景技術(shù)
DNA的提取是植物分子遺傳學(xué)及遺傳工程的前提。通常DNA提取方法需要滿(mǎn)足以下幾個(gè)主要條件：所得DNA具備理想的純度；DNA完整，斷裂少，降解程度小；方法方便便捷，成本低。提高基因組DNA制備的效率和降低成本是從事DNA分子標(biāo)記工作者共同關(guān)心的問(wèn)題。
目前，關(guān)于水稻基因組DNA提取方法有諸多報(bào)道，但常規(guī)提取方法如CTAB法和大量面市的DNA提取試劑盒，雖然可提到高質(zhì)量的DNA，但提取過(guò)程煩瑣，成本較高，不便于應(yīng)用在大規(guī)模的基因型檢測(cè)作業(yè)中。
而一些簡(jiǎn)易的適用于分子標(biāo)記輔助選擇、作圖群體、突變體篩選、種子檢驗(yàn)等需要大批量樣品進(jìn)行基因型分析的DNA提取方法，雖然已有不少簡(jiǎn)化，但仍存在操作步驟復(fù)雜、成本較高或其制備的模板DNA的擴(kuò)增結(jié)果不夠穩(wěn)定或只適用于葉片DNA的提取等問(wèn)題，因而還需進(jìn)一步探索高效、快速、簡(jiǎn)便、低成本的DNA提取方法
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，提供了一種利用PCR板高效便捷提取水稻DNA，并縮短PCR加樣時(shí)間的方法。
為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種高效便捷提取水稻DNA的方法，包括如下步驟：
(1)將200μL96孔PCR板置于冰上，用打孔器分別取2片新鮮葉片放入PCR板上；
(2)每孔加入70μL緩沖液A，用封板膜封好，立刻將平板放入PCR儀中加熱到95℃，保持10min；
(3)取出平板，迅速加入等體積的緩沖液B，混勻。
步驟(3)中的提取液1μL能夠直接作為模板DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)。
進(jìn)一步的，如需存留一周以上的時(shí)間進(jìn)行PCR檢測(cè)，則用排槍吸取上述提取液40μL到一塊新的200μL 96孔PCR孔板內(nèi)，加入3倍提取液體積的TE緩沖液；放入4℃冰箱保存，備用。
步驟(2)中所述緩沖液A為新鮮溶液。
步驟(2)中所述緩沖液A進(jìn)一步包括：800μL 20％Tween20。
步驟(2)中所述緩沖液A進(jìn)一步包括：160μL 5mol/L NaOH。
步驟(2)中所述緩沖液A進(jìn)一步包括：7.04mL ddH2O
步驟(3)中所述緩沖液B進(jìn)一步包括：1mL pH8.01mol/L Tris-HCl。
步驟(3)中所述緩沖液B進(jìn)一步包括：40μL pH8.00.5mol/LEDTA。
步驟(3)中所述緩沖液B進(jìn)一步包括：8.96mL ddH2O。
本發(fā)明有益的技術(shù)效果包括：
(1)本發(fā)明僅用NaOH、Tween20、Tris-HCl和EDTA 4種化學(xué)試劑，共140μL提取液，成本低。
(2)本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，僅需3步，每人每天可以提取上千份樣品。
(3)本發(fā)明儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，只需常規(guī)的PCR儀。
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