[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用胭脂紅作為探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖含量的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711493067.3
• 申請(qǐng)日: 2017-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108225879A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 白研;蘇政權(quán);毋福海
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東藥科大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N1/38
• 分類(lèi)號(hào): G01N1/38;G01N21/51
• 代理公司: 廣州勝沃園專(zhuān)利代理有限公司 44416
• 代理人: 孫文卉

本發(fā)明公開(kāi)了一種利用胭脂紅作為探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖含量的方法。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖能與胭脂紅結(jié)合形成離子締合物，使共振散射強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，殼聚糖濃度在一定濃度范圍內(nèi)與△I呈良好線性關(guān)系，以此作為殼聚糖的定量基礎(chǔ)，建立了利用胭脂紅作為探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖含量的方法。本方法具有操作簡(jiǎn)便，快速，成本低，靈敏度高，回收率高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)適合在實(shí)際應(yīng)用中推廣使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及殼聚糖含量測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種以胭脂紅為探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖含量的方法。

背景技術(shù)

殼聚糖，化學(xué)名稱(chēng)為聚葡萄糖胺(1，4)-2-氨基-2-脫氧-D-葡聚糖，是一種在自然界中廣泛存在于昆蟲(chóng)殼，蝦殼，螃蟹殼、軟體動(dòng)物的骨骼和某些藻類(lèi)等的骨骼中的天然高分子物質(zhì)。隨著不斷的研究，人們發(fā)現(xiàn)殼聚糖具有的生物功能性即抗腫瘤，抗凝血，抗菌、減肥降脂和增強(qiáng)免疫力等功能，使之在醫(yī)藥、食品、化工、化妝品、水處理、金屬提取及回收、生化和生物醫(yī)學(xué)工程等諸多領(lǐng)域的應(yīng)用得到巨大發(fā)展，并且有較大部分已進(jìn)入實(shí)用階段或商品化階段。因此，殼聚糖的準(zhǔn)確定量顯得十分重要，建立簡(jiǎn)便高效的方法測(cè)定殼聚糖含量有著重要的意義，這將進(jìn)一步推進(jìn)殼聚糖在各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用。

目前，殼聚糖分析研究及測(cè)定的方法主要有分光光度法、熒光分析法、電化學(xué)法、紅外光譜法測(cè)、液相色譜法、氣相色譜法等。如馬衛(wèi)興等人利用分光光度法研究殼聚糖與水溶苯胺藍(lán)的超分子反應(yīng)條件，并建立分析方法。穆志英等人建立核固紅熒光猝滅法測(cè)定殼聚糖含量，利用殼聚糖在pH＝3.8的醋酸-醋酸鈉緩沖介質(zhì)中，殼聚糖對(duì)核固紅的熒光強(qiáng)度有明顯的猝滅作用，且在一定濃度范圍內(nèi),殼聚糖的質(zhì)量濃度與熒光猝滅程度呈線性關(guān)系，據(jù)此建立了熒光猝滅法測(cè)定殼聚糖含量的新方法。商軍和王蓓兩人建立高效液相色譜法測(cè)定原料和復(fù)合預(yù)混料中的低聚殼聚糖含量。譚學(xué)才，麥智彬等人建立了以茜素紅(AR)為電活性探針間接測(cè)定無(wú)電活性的殼聚糖(CTS)的新方法。以上所述方法目前已報(bào)道的分光光度法存在靈敏度低、測(cè)定樣品時(shí)不專(zhuān)一的缺點(diǎn)，而液相色譜法、核磁共振、質(zhì)譜法等，存在耗時(shí)長(zhǎng)、成本相對(duì)較高等缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種胭脂紅為探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖含量的方法。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖與胭脂紅各自本身的共振散射強(qiáng)度較低，在一定條件下，殼聚糖能與胭脂紅結(jié)合形成離子締合物，使共振散射強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，并出現(xiàn)新的RRS光譜。殼聚糖濃度在一定范圍內(nèi)與△I呈線性關(guān)系。

本發(fā)明所涉及的一種利用胭脂紅作為探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖含量的方法，包括如下步驟：

一種利用胭脂紅作為探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖含量的方法，其特征在于包括如下步驟：

1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：向10mL比色管中加入一定濃度梯度的殼聚糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次分別加入甘氨酸-鹽酸緩沖溶液、胭脂紅溶液，混合均勻后定容，得到稀釋后的成濃度梯度的殼聚糖待測(cè)溶液，水浴加熱反應(yīng)一段時(shí)間，冷卻至室溫，檢測(cè)殼聚糖待測(cè)溶液的共振瑞利散射強(qiáng)度，具體以λex＝λem進(jìn)行同步掃描，記錄RRS光譜，并于366nm處分別測(cè)量離子締合物的I和試劑空白的I₀，ΔI＝I-I₀，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)一步得線性方程。

2)10μg/mL的樣品工作液的制備：稱(chēng)取一定量待檢測(cè)樣品的膠囊殼，使用冰醋酸溶解并將其定容得到樣品儲(chǔ)備液，用漏斗脫脂棉過(guò)濾儲(chǔ)備液，濾液經(jīng)6000r/min，離心機(jī)離心20min，取上清液2.5mL于100mL容量瓶，定容，得濃度為10μg/mL的樣品工作液。

3)樣品檢測(cè)：向10mL比色管中，按先后順序依次加入樣品操作液0.8mL，pH3.0的甘氨酸-鹽酸緩沖溶液1.0mL，胭脂紅溶液(1.0×10^-4mol/L)1.0mL，用水定容至10mL刻度線，混合均勻。60℃水浴10min，冷卻至室溫，檢測(cè)共振瑞利散射強(qiáng)度，由線性方程計(jì)算出待測(cè)樣品中殼聚糖的濃度。同時(shí)做加標(biāo)回收試驗(yàn)。