[發明專利]一種土壤中林可霉素殘留量的檢測方法

有效

• 申請號: 201711488116.4
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN107957463B
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發明（設計）人: 王義;張鵬;金昌福;李寧飛
• 申請（專利權）人: 寧夏希望田野生物農業科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 賈澤純

一種土壤中林可霉素殘留量的檢測方法，它涉及一種土壤中林可霉素殘留效價的檢測方法，該方法包括對照品溶液的制備、供試品溶液的制備，之后采用高效液相色譜法檢測，將上述標準品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀中，根據外標法計算林可霉素效價。本發明通過對色譜條件的優選及供試品、標準品制備方法的試驗，建立了土壤中林可霉素的高效液相色譜檢測分析方法；通過對色譜條件和凈化工藝的優化，建立了土壤中林可霉素的檢測方法，通過方法學驗證試驗研究表明：所建立的方法準確度高、專屬性強、重現性良好，能有效檢測土壤中殘留林可霉素。

技術領域

本發明涉及土壤的檢測檢驗技術領域，特別是涉及一種土壤中林可霉素殘留效價的檢測方法。

背景技術

獸用抗生素用于動物疾病預防、治療、提高飼料利用率和促進動物生長。隨著禽畜養殖業規模的擴大，抗生素使用量也隨之增加。獸用抗生素經過動物體內后主要以原藥和代謝產物的形式隨糞尿排出體外進入土壤，從而導致土壤中抗生素的污染，對生態安全和人體健康產生威脅。相關檢測發現，土壤中抗生素的含量已達到11～300μg/kg，主要是磺胺類、喹諾酮類、四環素類抗生素。建立土壤中不同種類抗生素的痕量檢測分析方法成為比較熱門的探索方向。但土壤中的抗生素主要是對于四環素類抗生素的分析檢測，林可霉素的檢測報道比較少見，且土壤樣品基質復雜，含有大量的有機酸等干擾成分，獸藥抗生素殘留在土壤中的含量又低，因此對樣品前處理和檢測的儀器都有很高的要求。

林可霉素類抗生素對大多數革蘭氏陽性菌及某些厭氧的革蘭氏陰性菌有效，主要用作獸藥治療雞的慢性呼吸道疾病和耐青霉素G的金色葡萄球菌和鏈球菌引起的感染，也能促進雞肉的生長，已經廣泛的用于禽畜養殖業中。林可霉素結構穩定可在土壤中存在長達5個月，隨著糞肥使用量的增加，其不斷在土壤中積累，進而影響土壤微生物群落結構，打破微生態平衡。為降低林可霉素所帶來的環境危害，須嚴格控制進入土壤中林可霉素的含量。因此建立快速、準確的土壤林可霉素檢測方法是研究和控制其生態風險的基礎。目前抗生素的檢測方法主要有微生物檢測、酶聯免疫法和色譜法。色譜法因檢出限低，精密度高應用比較廣泛。由于土壤基質復雜，含有大量的有機酸等干擾成分，有效去除雜質，快速定量是檢測的重點。

發明內容

本發明的目的是彌補現有技術中無法快速/準確檢測土壤中林可霉素的缺陷，沒有一種有效解決基質效應影響的問題，提供一種土壤中林可霉素提取且測定殘留量的方法，以期為檢測土壤中林可霉素的殘留量提供方法依據。

本發明的一種土壤中林可霉素殘留量的檢測方法，它是按照以下步驟進行的：

一、供試品樣品制備：

1)取含有林可霉素的土壤，加入提取劑，渦旋振蕩1min，于超聲中輔助提取30min，以3000～4000rpm離心10min，取上清液；

2)將上清液于30℃水浴旋轉蒸發至近干，然后用超純水復溶，得待處理樣品；

3)分別移取甲醇和超純水對HLB固相萃取柱進行活化后，加入待處理樣品，以1mL/min速度過柱，待樣液全部流出后，用超純水進行淋洗，淋洗后抽真空5～10min，分析物用體積百分含量為80％甲醇洗脫，收集洗脫液定容，搖勻，過0.45μm濾膜后，得供試品溶液；

二、標準曲線繪制：

用甲醇將標準貯備液稀釋成質量濃度為1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L、200.0mg/L和500.0mg/L的標準工作溶液，采用高效液相色譜法對上述標準工作溶液進行檢測，以測得峰面積作為縱坐標，以標準工作溶液濃度作為橫坐標，繪制標準曲線，并求回歸方程和相關系數；

三、測定：吸取上述標準工作溶液和供試品溶液注入液相色譜儀中，根據外標法計算泰樂菌素殘留量；采用高效液相色譜儀，即完成所述的土壤中林可霉素殘留效價的檢測；