[發明專利]一組鑒定僵蠶的特異性引物及其鑒定方法

有效

• 申請號: 201711487245.1
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN107937567B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 楊歡;周瑩;沈玉萍;楊婭婭;吳啟南;夏國華;陳宇菲;鹿蓓蓓
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/10;C12N15/11
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1.一組鑒定僵蠶的特異性引物，所述引物為PBM-1或PBM-2和PBB-1或PBB-2；PBM-1上下游引物如SEQ.ID.NO.1和2所示，PBM-2上下游引物如SEQ.ID.NO.3和4所示；PBB-1上下游引物如SEQ.ID.NO.5和6所示，PBB-2上下游引物如SEQ.ID.NO.7和8所示。

2.根據權利要求1所述的鑒定僵蠶的特異性引物，所述引物還包括引物PMA-1或PMA-2；PMA-1上下游引物如SEQ.ID.NO.9和10所示；PMA-2上下游引物如SEQ.ID.NO.11和12所示。

3.權利要求2所述的引物在鑒定僵蠶真偽或摻偽中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述應用為首先鑒定僵蠶是否來源于家蠶和白僵菌，其次鑒定其中是否摻雜綠僵菌。

5.一種特異性鑒定僵蠶的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的引物對、DNA陽性對照、PCR反應體系和/或電泳鑒定體系。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括權利要求2中所述的引物PMA-1或PMA-2。

7.一種特異性鑒定僵蠶的方法，其特征在于，采用權利要求5或6中所述的試劑盒進行，按照下述步驟進行：

（1）采用CTAB法提取僵蠶樣品的DNA；

（2）將僵蠶樣品的DNA模板與特異性引物進行PCR擴增；

（3）將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析和凝膠成像系統檢測條帶。

8.根據權利要求7所述的一種特異性鑒定僵蠶的方法，其特征在于，步驟（2）中所述的PCR擴增，其反應體系1×PCR緩沖液、2.0mmol/LMgCl₂、0.2mmol/LdNTPs、0.1μmol/L~0.4 μmol/L引物對、0.625UTaqDNA聚合酶、模板DNA1ng~600ng，以滅菌ddH₂O補足至25μL。

9.根據權利要求7所述的一種特異性鑒定僵蠶的方法，其特征在于，步驟（2）中所述的PCR擴增程序為：95℃預變性3min；95℃變性30s，56℃~65℃退火30s，72℃延伸1min，循環數30~40；72℃延伸7min。