[發(fā)明專利]一種土壤中紅霉素殘留量的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711483690.0
• 申請(qǐng)日: 2017-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN108195963B
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王義;張鵬;金昌福;李寧飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧夏希望田野生物農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 賈澤純

一種土壤中紅霉素殘留量的檢測(cè)方法，它涉及一種土壤中紅霉素殘留效價(jià)的檢測(cè)方法，該方法包括對(duì)照品溶液的制備、供試品溶液的制備，之后采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法以梯度洗脫的方式將上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀中，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法計(jì)算紅霉素效價(jià)。本發(fā)明通過(guò)對(duì)色譜條件的優(yōu)選及供試品、標(biāo)準(zhǔn)品制備方法的試驗(yàn)，建立了土壤中紅霉素的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析方法；通過(guò)對(duì)色譜分離系統(tǒng)的優(yōu)化，建立了土壤中紅霉素的檢測(cè)方法，通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)研究表明：所建立的方法準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性良好，能有效檢測(cè)土壤中紅霉素效價(jià)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及土壤的檢測(cè)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種土壤中紅霉素殘留效價(jià)的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

微量抗生素殘留在菌渣中，在多種因素作用下發(fā)生降解，因此菌渣中還含有其降解產(chǎn)物。若抗生素菌渣進(jìn)入到土壤環(huán)境中，殘留的抗生素及其降解產(chǎn)物不斷積累，將導(dǎo)致微生物產(chǎn)生耐藥基因，抗生素便無(wú)法發(fā)揮其抗菌作用，嚴(yán)重威脅到人類的身體健康。當(dāng)抗生素菌渣作為肥料施用于蔬菜種植，隨著雨水的沖刷作用，抗生素可能會(huì)進(jìn)入到地表水及更深層次的土壤中，破壞生態(tài)環(huán)境?？股匾矔?huì)隨著植物的吸收進(jìn)入到植物體內(nèi)，由于食物鏈的作用，人體體內(nèi)也會(huì)富集抗生素，產(chǎn)生耐藥基因，危害人類身體健康。

紅霉素由紅霉素鏈霉菌產(chǎn)生，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有較強(qiáng)的作用。目前紅霉素已成為全球第三大抗生素。紅霉素是由紅霉內(nèi)酯、去氧氨基己糖和紅霉糖縮合而成的堿性苷。紅霉內(nèi)酯環(huán)含有13個(gè)碳原子，內(nèi)酯環(huán)的C-3通過(guò)氧原子與紅霉糖相連接，C-5通過(guò)氧原子與去氧氨基己糖相連接。紅霉糖本身不含氮，是含有一個(gè)甲氨基的己糖，去氧氨基己糖是3-二甲氨基去氧己糖。紅霉素是堿性化合物，溶于醇類、醚、丙酮、氯仿、醋酸乙酯和醋酸戊酯，不甚溶于水。

由于紅霉素殘留在土壤中會(huì)嚴(yán)重威脅到生態(tài)平衡，故為了研究紅霉素菌渣有機(jī)肥在土壤中環(huán)境行為、穩(wěn)定性及衰減規(guī)律，必須首先建立土壤中紅霉素殘留效價(jià)的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在檢測(cè)限低，回收率低，不能快速、精確檢測(cè)土壤中紅霉素殘留量問(wèn)題，且沒有一種有效解決基質(zhì)效應(yīng)的影響，而提供了一種土壤中紅霉素殘留量的檢測(cè)方法。

本發(fā)明的一種土壤中紅霉素殘留量的檢測(cè)方法，它是按照以下步驟進(jìn)行的：

一、供試品樣品制備：

1)稱取含有紅霉素的土壤，加入提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液，渦旋振蕩45～60s，然后在超聲中輔助提取20～30min，再以3500～4000rpm離心5～10min，取上清液，收集沉淀；

2)向步驟1)收集的沉淀中加入提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液，渦旋振蕩45～60s，然后在超聲中輔助提取20～30min，再以3500～4000rpm離心5～10min，取上清液；

3)合并步驟1)和步驟2)的上清液，置于35～40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至上清液體積的五分之一，得無(wú)機(jī)相；

4)向無(wú)機(jī)相中加入pH為4～7的Tris-CaCl₂復(fù)溶液，震蕩渦旋，待殘?jiān)咳芙夂螅{(diào)節(jié)至pH＝8～10，再加入分散劑甲醇，萃取劑1,2-二氯乙烷，渦旋30～45s，4000r/min離心5min，抽取下層液體；

5)向步驟4)下層液體加入萃取劑1,2-二氯乙烷渦旋30～45s，4000r/min離心5min，抽取下層液體；

6)重復(fù)步驟1)至5)的操作，抽取下層液體；

7)合并步驟5)和步驟6)的下層液體，用氮?dú)獯抵两珊笥眉状紡?fù)溶，將復(fù)溶液過(guò)0.45μm濾膜后，即得供試品樣品；

二、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：