[發(fā)明專利]一種土壤中紅霉素殘留量的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711483690.0
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN108195963B
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發(fā)明（設計）人: 王義;張鵬;金昌福;李寧飛
• 申請（專利權）人: 寧夏希望田野生物農業(yè)科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 賈澤純

1.一種土壤中紅霉素殘留量的檢測方法，其特征在于它是按照以下步驟進行的：

一、供試品樣品制備：

1)稱取含有紅霉素的土壤，加入提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液，渦旋振蕩45～60s，然后在超聲中輔助提取20～30min，再以3500～4000rpm離心5～10min，取上清液，收集沉淀；

2)向步驟1)收集的沉淀中加入提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液，渦旋振蕩45～60s，然后在超聲中輔助提取20～30min，再以3500～4000rpm離心5～10min，取上清液；

3)合并步驟1)和步驟2)的上清液，置于35～40℃水浴旋轉蒸發(fā)至上清液體積的五分之一，得無機相；

4)向無機相中加入pH為4～7的Tris-CaCl₂復溶液，震蕩渦旋，待殘渣全部溶解后，調節(jié)至pH＝8～10，再加入分散劑甲醇，萃取劑1,2-二氯乙烷，渦旋30～45s，4000r/min離心5min，抽取下層液體；

5)向步驟4)下層液體加入萃取劑1,2-二氯乙烷渦旋30～45s，4000r/min離心5min，抽取下層液體；

6)重復步驟1)至5)的操作，抽取下層液體；

7)合并步驟5)和步驟6)的下層液體，用氮氣吹至近干后用甲醇復溶，將復溶液過0.45μm濾膜后，即得供試品樣品；

二、標準曲線繪制：

用甲醇將紅霉素標準貯備液稀釋成質量濃度為1.00mg/L、5.00mg/L、10.00mg/L、20.00mg/L、50.00mg/L、100.00mg/L、200.00mg/L、500.00mg/L和1000.00mg/L的標準工作溶液，采用高效液相色譜-質譜法對上述標準工作溶液進行檢測，以測得峰面積作為縱坐標，以標準工作溶液濃度作為橫坐標，繪制標準曲線，并求回歸方程和相關系數(shù)；

三、吸取上述標準工作品溶液和供試品樣品注入超高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質譜儀中進行檢測，根據(jù)內標法計算紅霉素殘留效價；

色譜條件：色譜柱：ACQUITY UPLCBEH C18柱，色譜柱內徑為2.1mm，柱長50mm，填料顆粒直徑為1.7μm；流動相：0.1％甲酸水溶液+甲醇；流速：0.2mL/min；梯度：0～2.5min，55％A+45％B；2.5～4min，75％A+25％B；4～7min，90％A+10％B；7～8min，75％A+25％B；進樣量：10μL；

質譜條件：離子源:電噴霧離子源；檢測模式:多反應監(jiān)測；掃描方式:正離子掃描；脫溶劑氣流量:900L/h；錐孔氣流量:50L/h；毛細管電壓:3.5kV；脫溶劑氣溫度:400℃；

其中，含有紅霉素的土壤與提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液的質量體積比為1g：12～17mL；步驟2)中沉淀與提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液的質量體積比為1g：12～17mL；無機相與pH為4～7的Tris-CaCl₂復溶液的體積比為4～8:10；步驟4)中無機相與分散劑甲醇和萃取劑1,2-二氯乙烷的體積比為4～8:1:1；土壤中紅霉素殘留量為500～1000mg/kg。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種土壤中紅霉素殘留量的檢測方法，其特征在于含有紅霉素的土壤與提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液的質量體積比為1g：15mL。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種土壤中紅霉素殘留量的檢測方法，其特征在于步驟2)中沉淀與提取劑乙腈-Tris-CaCl₂溶液的質量體積比為1g：15mL。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種土壤中紅霉素殘留量的檢測方法，其特征在于無機相與pH為4～7的Tris-CaCl₂復溶液的體積比為6:10。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種土壤中紅霉素殘留量的檢測方法，其特征在于步驟4)中無機相與分散劑甲醇和萃取劑1,2-二氯乙烷的體積比為6:1:1。