[發(fā)明專(zhuān)利]一種土壤中泰樂(lè)菌素殘留量的檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711479861.2
• 申請(qǐng)日: 2017-12-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108226339A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王義;張鵬;金昌福;李寧飛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 寧夏希望田野生物農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 賈澤純

一種土壤中泰樂(lè)菌素殘留量的檢測(cè)方法，它涉及一種土壤中泰樂(lè)菌素殘留效價(jià)的檢測(cè)方法，該方法包括對(duì)照品溶液的制備、供試品溶液的制備，之后采用高效液相色譜法以梯度洗脫的方式將上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀中，根據(jù)外標(biāo)法計(jì)算泰樂(lè)菌素效價(jià)。本發(fā)明通過(guò)對(duì)色譜條件的優(yōu)選及供試品、標(biāo)準(zhǔn)品制備方法的試驗(yàn)，建立了土壤中泰樂(lè)菌素的高效液相色譜檢測(cè)分析方法；通過(guò)對(duì)色譜以及質(zhì)譜系統(tǒng)的優(yōu)化，建立了土壤中泰樂(lè)菌素的檢測(cè)方法，通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)研究表明：所建立的方法準(zhǔn)確度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性良好，能有效檢測(cè)土壤中泰樂(lè)菌素效價(jià)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及土壤的檢測(cè)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種土壤中泰樂(lè)菌素殘留效價(jià)的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

在我國(guó)，禽畜養(yǎng)殖業(yè)的規(guī)模越來(lái)越大，為了促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)以及防病治病，抗生素使用量也隨之增加，由此而產(chǎn)生的抗生素濫用問(wèn)題愈發(fā)嚴(yán)重。抗生素在動(dòng)物體內(nèi)的殘留量很少，大部分抗生素及降解產(chǎn)物會(huì)以糞便的形式排出體外，經(jīng)過(guò)一定的處理或不作任何處理便施用于作物種植，尤其是大棚蔬菜種植，抗生素也隨之進(jìn)入土壤環(huán)境，并對(duì)土壤微生物及土壤酶活性產(chǎn)生影響，破壞生態(tài)環(huán)境，經(jīng)食物鏈作用也可能進(jìn)入人體，若產(chǎn)生耐藥基因則會(huì)嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。抗生素作為一種新的環(huán)境污染物所引起的危害不容忽視，必須高度重視。相關(guān)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，土壤中抗生素的含量已達(dá)到11～300μg/kg，主要是磺胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)抗生素。建立土壤中不同種類(lèi)抗生素的痕量檢測(cè)分析方法成為比較熱門(mén)的探索方向。但土壤中的抗生素主要是對(duì)于四環(huán)素類(lèi)抗生素的分析檢測(cè)，泰樂(lè)菌素的檢測(cè)報(bào)道比較少見(jiàn)，且土壤基質(zhì)不同提取和凈化條件的選擇也有所不同。

泰樂(lè)菌素已經(jīng)廣泛的用于禽畜養(yǎng)殖業(yè)中，是目前國(guó)際上廣泛使用的獸用抗生素之一，是使用最為廣泛的豬飼料添加劑。據(jù)國(guó)家農(nóng)業(yè)部統(tǒng)計(jì)，目前國(guó)際市場(chǎng)對(duì)泰樂(lè)菌素年需求量在1500噸左右，國(guó)內(nèi)的年需求量為200噸。據(jù)估計(jì)美國(guó)每年有590噸的泰樂(lè)菌素用于牛和豬的飼料添加劑。日本有50％豬飼料添加了泰樂(lè)菌素。我國(guó)泰樂(lè)菌素已使用多年，而且大量出口到國(guó)外，泰樂(lè)菌素的年出口量均超千噸。在2007年出口的抗生素原料中，獸用抗生素的出口價(jià)值占了全部抗生素出口金額的28％，數(shù)量規(guī)模占了55％。大部分獸用抗生素2007年的出口量比上年同期有所增加，而硫酸黏桿菌素、泰樂(lè)菌素和吉他霉素的同比增長(zhǎng)率較為顯著。

由于泰樂(lè)菌素殘留在土壤中會(huì)嚴(yán)重威脅到生態(tài)平衡，故為了研究泰樂(lè)菌素菌渣有機(jī)肥在土壤中環(huán)境行為、穩(wěn)定性及衰減規(guī)律，必須首先建立土壤中泰樂(lè)菌素殘留效價(jià)的檢測(cè)方法。由于基質(zhì)效應(yīng)的影響，故不同于菌渣已建立的方法，需要重新建立在土壤中目標(biāo)物質(zhì)殘留的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決土壤中痕量抗生素殘留的檢測(cè)問(wèn)題，而提供了一種土壤中泰樂(lè)菌素殘留量的檢測(cè)方法。

本發(fā)明的一種土壤中泰樂(lè)菌素殘留量的檢測(cè)方法，它是按照以下步驟進(jìn)行的：

一、供試品樣品制備：

1)稱(chēng)取含有泰樂(lè)菌素的土壤，加入提取劑，渦旋振蕩1～5min后，于超聲中輔助提取20～30min，以3000～4000rpm離心5～10min，取上清液，并收集沉淀備用；

2)將上步收集的沉淀，加入提取劑，渦旋振蕩1min后，于超聲中輔助提取30min，以3000～4000rpm離心10min，取上清液；

3)合并步驟1)和步驟2)的上清液，將上清液于40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/4～1/5，得無(wú)機(jī)相，向無(wú)機(jī)相中加入甲醇溶液以及pH為5.5、濃度為0.15mol/L的乙酸鈉緩沖溶液；充分震蕩渦旋，待殘?jiān)咳芙夂螅D(zhuǎn)移到離心管中，得待凈化樣品；

4)用甲醇和超純水對(duì)HLB固相萃取柱進(jìn)行活化，加入待凈化樣品，以1mL/min速度過(guò)柱，待樣液全部流出后，用水和淋洗液依次進(jìn)行淋洗，抽干所有的液體，分析物用甲醇洗脫并收集，搖勻，過(guò)0.45μm濾膜后，得供試品樣品；