[發明專利]一種快速檢測食品中沙門氏菌的方法

在審

• 申請號: 201711478860.6
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN108203736A
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發明（設計）人: 孫永軍;王湛;侯磊;朱可欣;杜心培
• 申請（專利權）人: 北京工業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12R1/42
• 代理公司: 北京思海天達知識產權代理有限公司 11203
• 代理人: 張立改

1.一種快速檢測食品中沙門氏菌的方法，其特征在于，用PCR方法對待測食品樣品中沙門氏菌的inVA基因進行檢測，包括以下步驟：

(1)將待測食品樣品加入緩沖蛋白胨水中增菌，然后用生理鹽水洗菌后煮沸裂解細胞，離心取上清液；

(2)以步驟(1)中獲得的上清液為PCR反應模板，并利用沙門氏菌inVA基因的檢測引物進行PCR檢測；

其中，沙門氏菌inVA基因的檢測引物包括：上游引物inVAF即基因序列SEQ ID NO:1；下游引物inVAR即基因序列SEQ ID NO:2。

2.按照權利要求1所述的一種快速檢測食品中沙門氏菌的方法，其特征在于，在步驟(1)中，將待測食品樣品加入緩沖蛋白胨水中，在37℃下增菌18～24h，獲得增菌液，將增菌液離心后獲得沉淀，將沉淀用生理鹽水洗兩次后加入去離子水充分重懸，煮沸后，冷卻，離心取上清液。

3.按照權利要求2所述的一種快速檢測食品中沙門氏菌的方法，其特征在于，將增菌液離心為將增菌液在12000rpm離心10min；所述離心取上清液為12000rpm離心5min取上清液。

4.按照權利要求2所述的一種快速檢測食品中沙門氏菌的方法，其特征在于，生理鹽水為質量分數為0.85％的NaCl溶液；所述煮沸的時間為15min；所述增菌液與去離子水的體積比為10:1。

5.按照權利要求1所述的一種快速檢測食品中沙門氏菌的方法，其特征在于，在步驟(2)中，PCR反應體系為20μL，包括2μL 10×PCR緩沖液、200μM dNTPs、1.5mM MgCl₂、8pmol上游引物inVAF、8pmol下游引物inVAR、2μL PCR模板，用滅過菌的去離子水補至總體積20μL。

6.按照權利要求1所述的一種快速檢測食品中沙門氏菌的方法，其特征在于，在步驟(2)中，反應條件為：94℃4min熱變性；94℃40s，60℃40s，72℃1min，35個循環；72℃延伸10min。

7.按照權利要求1所述的一種快速檢測食品中沙門氏菌的方法，其特征在于，在步驟(2)中，PCR基因檢測后的產物用含有EB的瓊脂糖凝膠電泳分析，有陽性條帶的待測食品樣品即為沙門氏菌感染的食品。

8.按照權利要求7所述的一種快速檢測食品中沙門氏菌的方法，其特征在于，陽性條帶的片段大小為825bp。

9.按照權利要求1所述的一種快速檢測食品中沙門氏菌的方法，其特征在于，所述食品選自全脂奶粉、生牛肉和加工過的雞肉。