[發明專利]一種輔助檢測大豆百粒重的dCAPS標記及其應用

有效

• 申請號: 201711470082.6
• 申請日: 2017-12-29
• 公開（公告）號: CN107988414B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 王曉波;趙敬會;高雅麗;化宿南;李佳佳;邱麗娟
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 安徽匯樸律師事務所 34116
• 代理人: 劉海涵

本發明公開了一種輔助檢測大豆百粒重的dCAPS標記及其應用，采用本發明的dCAPS標記鑒定大豆百粒重大小時，基因分析系統檢測酶切產物是否含有107bp和46bp兩條帶或者153bp的一條帶產物，若酶切產物中含有107bp條帶，被檢測的大豆材料為小籽粒大豆，若酶切產物中只含有153bp的條帶，則被檢測的大豆材料為大籽粒大豆材料。本發明的優點在于：提供了一種輔助檢測大豆百粒重的方法，該分子標記為一種新的鑒定大豆百粒重的dCAPS標記，能夠方便、有效、準確的鑒定出大豆百粒重大小，利用本發明的分子標記可以篩選大籽粒和小籽粒大豆材料，提高育種過程中選擇百粒重高的大豆品種的效率，并且可以加快小籽粒大豆的育種進程。

技術領域

本發明涉及的是大豆遺傳育種領域，尤其涉及一種用于輔助檢測大豆百粒重的dCAPS標記及其應用。

背景技術

種子大小是大豆育種的主要目標，對種子外觀，品質和產量起決定性作用。通常用100-種子重量(100-SW)表示的大豆的種子重量受種子大小的影響，種子大小是一個重要的產量構成因素，與大豆種子產量呈正相關。因此，增加100-SW的選擇已經成為大豆育種計劃和遺傳改良的主要目標之一。然而，大豆的種子產量或100-SW由多個數量性狀位點(QTL)或基因和各種環境條件控制，因此，使用傳統的育種方法復雜且難以提高大豆的產量。分子標記為育種者尋找新的變異來源提供了快速而準確的方法，也可以用于調查控制數量遺傳性狀的遺傳因子。使用分子標記間接選擇重要的農藝性狀(如種子大小，種子重量等)或標記輔助選擇(MAS)可以提高傳統植物育種計劃的效率。大豆育種的主要目標是改善種子產品的質量以滿足人類和/或動物的需求。隨著大豆共有遺傳圖譜的發展，分子標記顯著促進了許多大豆群體中控制重要數量性狀的常見QTL的鑒定。然而，大多數鑒定的QTL/SNP標記很少應用于大豆的育種計劃。據報道，通過全基因組鑒定的SNP基因型有效地促進了關聯分析在作物中QTL作圖的適用性。具有SNP標記的GWAS已經在許多植物物種中進行了各種重要性狀的鑒定，并且能夠鑒定不同作物中廣泛復雜性狀的致病基因，包括擬南芥，玉米，高粱和大豆因此，鑒定與種子大小相關性狀相關的SNP位點將有助于在大豆育種進程。

基于PCR的標記已被廣泛用作快速和可靠地檢測SNP的手段，SNP產生特異性限制性位點以區分一對等位基因。衍生的切割擴增多態性序列(dCAPS)標記分析使我們能夠區分不同的單核苷酸變化，不產生限制性位點差異的等位基因。使用來自錯配PCR引物的擴增的PCR片段(產物)產生由合適的限制酶消化的限制性位點，并通過凝膠電泳解析。近年來，基于快速有效鑒定SNP等位基因的優勢，dCAPS標記已經被廣泛應用于檢測許多作物如小麥，水稻，大麥等。在本研究中，我們通過GWAS和SNP基因型分析來檢測多個環境下與大豆種子大小性狀相關的SNP標記或等位基因位點。我們利用不同種群的大豆在14個環境或遺傳背景(3個生態區)中檢測到大豆種子大小(100-SW)的位點。研究結果表明，該基因座是一個新穎穩定的基因座，在不同大豆群體中使用dCAPS標記對100-SW有顯著影響。我們的研究結果可以提供給大豆籽粒大小的選擇方向和理論基礎。

栽培大豆的百粒重通常在本6-55g之間。百粒重在12g以下一般成為小粒豆。大籽粒大豆是構成產量的重要因素，是育種過程中必不可少的重要指標，小籽粒大豆較于大粒大豆而言，具有高蛋白，高不飽和脂肪酸、粗纖維，高鈣、鋅含量，低脂肪、糖，亞麻酸亞油酸配比合適等優勢，所以小籽粒大豆在育種目標上與大籽粒大豆同樣重要。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供了一種用于輔助檢測大豆百粒重的dCAPS標記及其應用，以解決難以有效篩選大粒和小粒大豆材料、現有篩選技術穩定性較差等問題。

本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明提供一種輔助檢測大豆百粒重大小的dCAPS標記，用于擴增標記的引物的核苷酸序列為:

SEQ ID NO.1：

上游引物：TAAATTTAAGAAAAAATAATTAACAACAATTAATTAATATCATCTA