[發明專利]LDLR過表達在NK細胞過繼治療中的應用

有效

• 申請號: 201711463607.3
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108392492B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 王紅陽;付靜;秦文昊;楊知時;陳瑤
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學東方肝膽外科醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00;C07K14/705;C12N15/12
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發明涉及LDLR過表達在抗腫瘤NK過繼治療中的應用。揭示了一種通過轉基因技術增強NK細胞的抗腫瘤療效的方法，通過在NK細胞中過表達低密度脂蛋白受體，增強NK細胞抗腫瘤活性，經過改造的NK細胞在腫瘤過繼治療中具有顯著增強的療效。此外，本發明還提供了以膽固醇處理自然殺傷細胞以增強NK細胞的抗腫瘤能力的方法。本發明為NK細胞的過繼治療提供了新的治療策略和改進思路。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，更具體地，本發明涉及LDLR過表達在抗腫瘤NK過繼治療中的應用。

背景技術

腫瘤的免疫治療是近年來興起的最有前景的新療法，該療法借助于調節腫瘤細胞和宿主免疫反應，來增強免疫系統識別和殺傷腫瘤細胞的能力。目前腫瘤的免疫治療可分為以下幾類：(1)非特異性免疫治療，指應用一些免疫調節劑通過非特異性地增強機體的免疫功能，激活機體的抗腫瘤免疫應答，以達到治療腫瘤的目的。(2)免疫檢查點阻斷治療，如已經被FDA批準用于惡性腫瘤治療的抗PD1藥物，以及抗CTLA-4藥物等。(3)過繼免疫治療，指向將有免疫活性的自體或者同種異體的免疫細胞輸給患者，為患者提供現成的免疫能力，直接殺傷腫瘤或激發機體抗瘤免疫效應，從而達到治療惡性腫瘤的目的，為了達到更好的抗腫瘤效果，用于過繼免疫療法的免疫活性細胞必須具有較強的細胞毒活性和增殖能力。

自然殺傷細胞(Natural Killer cell，NK)是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調節有關，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發生，能夠識別并殺傷靶細胞，此外，NK細胞還參與骨髓移植后移植物抗白血病效應。，在體外NK細胞可殺傷某些淋巴樣和髓樣白血病細胞。其發揮作用的效應機制為：(1)自然殺傷活性；(2)殺傷介質主要有穿孔素，NK細胞毒因子和TNF等；(3)抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)；(4)NK細胞產生的細胞因子，發揮調節免疫和造血以及直接殺傷靶細胞的作用。NK細胞具有非專一性的細胞毒殺作用，其沒有T細胞或B細胞所具有的特異性受體，不涉及進行受體的基因重組。NK細胞對靶細胞的識別和殺傷依賴于其細胞表面固定表達的激活性受體和抑制性受體，所以它能迅速識別和殺傷腫瘤細胞，并通過分泌細胞因子等招募并激活T細胞，巨噬細胞等，共同殺傷腫瘤。

目前NK細胞已被用于腫瘤免疫過繼治療，并且取得了很好的療效，表明制備較強的細胞毒活性的NK細胞在免疫過繼治療領域有良好的應用前景。

發明內容

本發明的目的在于提供LDLR過表達在抗腫瘤NK過繼治療中的應用。

在本發明的第一方面，提供一種提高自然殺傷(NK)細胞對于腫瘤細胞的殺傷能力的方法，包括：在自然殺傷細胞中增加低密度脂蛋白受體(LDLR)的表達；或者，以膽固醇處理自然殺傷細胞。

在一個優選例中，所述的增加低密度脂蛋白受體(LDLR)的表達包括：在自然殺傷細胞中重組表達外源的低密度脂蛋白受體(LDLR)；較佳地，所述的重組表達外源的低密度脂蛋白受體的方法包括：將表達構建物(如表達載體)引入到自然殺傷細胞中，所述的表達構建物帶有低密度脂蛋白受體的表達盒。

在另一優選例中，所述的提高自然殺傷細胞對于腫瘤細胞的殺傷能力的方法為非治療性的方法。

在另一優選例中，所述的在自然殺傷細胞中重組表達外源的低密度脂蛋白受體作為單獨唯一的提高自然殺傷細胞對于腫瘤細胞的殺傷能力的方法。

在另一優選例中，所述的以膽固醇處理自然殺傷細胞包括：將膽固醇加入到含有自然殺傷細胞的溶液、懸浮液或培養基中。較佳地，膽固醇在溶液、懸浮液或培養基中的濃度為0.5～100ug/ml；較佳地為1～50ug/ml；更佳地為5～20ug/ml。

在另一優選例中，所述的腫瘤是能被自然殺傷細胞識別的腫瘤；較佳地，所述的腫瘤包括但不限于：白血病、黑色素瘤、肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、膽管癌、膽囊癌、結直腸癌、前列腺癌、乳腺癌。