[發明專利]膠質瘤診斷標志物circ17:47618350|47619164及應用

有效

• 申請號: 201711461401.7
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107937540B
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 劉洋;武明花;李沛瑤;劉濤;付海娟;馮劍波;張嚴
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明屬于生物技術領域，公開了膠質瘤診斷標志物circ17:47618350|47619164及應用。在本發明中，首次發現膠質瘤患者血清外泌體中circ17:47618350|47619164的表達水平相比于對照組明顯升高(p＝0.0218)，ROC曲線分析則顯示其對膠質瘤具有較高診斷價值(AUC＝0.875，P0.001，靈敏度和特異性分別為96.3％和72.7％)。因此通過檢測膠質瘤患者血清外泌體中circ17:47618350|47619164的表達水平，可對膠質瘤患者做出早期、快速的無創性診斷。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于膠質瘤診斷的血清circRNA標志物circ17:47618350|47619164、以及檢測該標志物的試劑用于制備膠質瘤診斷制劑的應用、還有試劑盒。

背景技術

腦膠質瘤起源于腦部神經膠質細胞，是常見的顱內腫瘤，約占中樞神經系統腫瘤的40％～50％，其中惡性膠質瘤(世界衛生組織分類Ⅲ、Ⅳ級)約占所有膠質瘤的77.5％。腦膠質瘤具有“三高一低”的特點，即高發病率、術后高復發性、高病死率及治愈率低，最大的生物學特性是腫瘤細胞呈浸潤性生長，手術常無法全部切除。盡管其治療方法已經由單一的手術治療發展到今天的手術加放化療等綜合治療，但是在過去的幾十年里腦膠質瘤患者的預后并未得到明顯改善。因此，尋找腦膠質瘤早期診斷、療效評價及判斷預后的指標至關重要。

環狀RNA(circular RNA，circRNA)是一種新興的內源性非編碼RNA(non-codingRNA，ncRNA)，在最近幾年逐漸受到廣泛關注，是目前RNA研究的熱點。circRNA通過外顯子環化或內含子環化將3’和5’末端連接起來形成完整的環形結構，因而比線性RNA更穩定，更具有保守性，可在生物體中以多種類型大量存在。越來越多的研究者發現，circRNA在基因表達調控中具有重要作用，這豐富了人們對內源性非編碼RNA的認識，提示circRNA在臨床診斷和治療方面具有廣闊的前景。近年來逐漸發現外泌體中也含有大量的circRNA，可能發揮重要作用。目前，由于circRNA具有豐富性、穩定性、高保守性和時空特異性等特點，在腫瘤診斷標志物方面正發揮越來越大的作用。

發明內容

本發明的第一個目的是：提供一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物。

主要內容包括：一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物circ17:47618350|47619164，其序列如SEQ NO:1所示。該circRNA位于人類的第17號染色體上，全長264bp。

本發明的第二個目的是，提供檢測所述的circRNA標志物在血清外泌體中表達量的試劑在制備膠質瘤診斷制劑中的應用。

本發明的第三個目的是，提供一種膠質瘤診斷試劑盒，其能夠測定血清外泌體中的circ17:47618350|47619164的含量。

所述的膠質瘤診斷試劑盒，含有檢測circ17:47618350|47619164含量的PCR引物。優選引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的膠質瘤診斷試劑盒，除circ17:47618350|47619164的引物外，還含有從血清中提取外泌體、由外泌體中提取RNA并進行逆轉錄及熒光定量PCR的所有試劑。

包括：

(1)提取血清外泌體所需試劑：Total Exosome Isolation Reagent(fromserum)，可由Invitrogen公司購得，貨號4478360；

(2)提取外泌體RNA所需試劑：Trizol試劑、三氯甲烷、異丙醇、75％乙醇、無酶水；

(3)逆轉錄所需試劑：隨機引物(Random Primer)、無酶水、5×逆轉錄緩沖液、三磷酸堿基脫氧核苷酸、RNA酶抑制劑、MMLV逆轉錄酶；