[發明專利]小麥赤霉病谷粒菌種制作及使用方法

有效

• 申請號: 201711459576.4
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN108277165B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 張曉軍;閻曉濤;田志剛;李光蓉;暢志堅;李欣;郭慧娟;喬麟軼;任永康;車麗;高偉;秦秀珍
• 申請（專利權）人: 山西省農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/77
• 代理公司: 太原科衛專利事務所(普通合伙) 14100
• 代理人: 朱源

1.一種小麥赤霉病谷粒菌種制作方法，包括以下操作步驟：

a、準備新鮮飽滿，無蟲蛀及發霉的綠豆50g，加入純凈水1200ml，置于火上燒開，水沸騰后熬制15-20min，在綠豆剛剛開花的時候關火，用細紗布濾去綠豆殘渣，僅保留綠豆水，補充純凈水至1000ml，配制成5%的綠豆水，備用；

b、準備干燥、無霉變、去凈浮皮、碎渣的新鮮帶殼谷粒1kg，置于干凈容器中，加入溫熱的5%綠豆水，充分攪拌使谷粒完全濕潤，加蓋保濕4小時，使谷粒充分吸水；

c、濾去多余水分，將浸泡好的谷粒在陰涼通風處攤開晾干30min，使谷粒持水率達到60%，用手捏不成團即可；

d、將處理好的谷粒分裝到聚丙烯滅菌袋中，每袋分裝300-500g，輕壓使其保持較為緊密的狀態；

e、用透氣的菌種袋海綿封口套環在聚丙烯滅菌袋兩端進行封口，制作成菌筒，防止雜菌污染；

f、制作好的菌筒置于高壓滅菌鍋中，125℃滅菌2小時，放氣后晾至室溫；

g、在超凈工作臺上打開菌筒一端的海綿封口套環的海綿蓋，用滅過菌的鑷子夾取黃豆大的一小塊赤霉菌種，放入菌筒一端谷粒上，蓋好透氣海綿蓋；另一端如法炮制，使菌筒兩端都接上菌種；

h、接好菌的菌筒置于完全黑暗的培養箱或培養間中25℃恒溫培養，保持通風，培養箱或培養間保持相對濕度60 %，菌種培養期間間隔1-2天翻轉一次菌筒，保證菌絲生長一致，7-10天，待菌絲長滿菌筒后，菌筒培養結束；

i、在超凈工作臺上將培養好的菌筒一端打開，將菌種轉移到無菌的透氣紙袋中，將帶菌的谷粒壓散，置于陰涼通風處懸掛晾干；

j、完全晾干的菌種可裝入無菌自封口塑料袋中，貼上菌種標簽，注明菌種名稱及日期，在4℃條件下避光保存；或者裝入真空包裝袋中，抽真空后，置于-20℃條件下長期保存。

2.根據權利要求1所述方法制得的小麥赤霉病谷粒菌種使用方法，包括以下操作步驟：

一、檢測活性：在干凈的培養皿中鋪一張濾紙，加入少量滅菌蒸餾水，使濾紙完全濕潤，每個培養皿中放入50粒谷粒菌種，使菌種完全散開，加蓋后貼上菌種標簽，置于完全黑暗的培養箱中25℃恒溫培養，36小時后觀察菌絲生長情況，若谷粒菌種周圍長滿白色菌絲，表明菌種具有活性，若谷粒菌種未生長菌絲，則表明菌種失去活性，安排2-3次重復，記錄并統計具有活性菌種的比例，若具有活性菌種占90%以上，則可用于田間接菌；

二、采用單花接菌法進行接菌，接菌時期為小麥抽穗后至揚花前，接菌部位為小麥基部最下方小穗一側往上數第6個小穗的右側小花，選取抽穗2-3天的穗子，用鑷子夾取一粒谷粒菌種，放入目標小穗右側小花的內稃中，用手持噴霧水壺對準接菌穗子噴2-3下純凈水，保持穗子濕潤，將穗子包一層透明保鮮膜，或用PE塑料袋套住該麥穗保濕，懸掛標簽，記錄接菌時間，每行材料接菌至少10個穗子；

三、接菌后注意觀察接菌部位，保濕3-5天，待接菌小穗外稃變褐后，取下保鮮膜或塑料袋；

四、加裝彌霧保濕系統，每日噴水5-10次，使其生長環境保持濕度大于50%，濕度越大越有利于赤霉菌擴展，若氣候干燥，則適當增加噴水次數；

五、分別于接菌后21天和28天調查赤霉病發病情況。