[發明專利]一種控制酒萸肉炮制工藝參數的指紋圖譜建立方法

在審

• 申請號: 201711458708.1
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN109975442A
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發明（設計）人: 鄧蕓;黃勝;葉惠煊;周良;袁莉;袁利群
• 申請（專利權）人: 九芝堂股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種控制酒萸肉飲片炮制工藝參數的指紋圖譜建立方法，包括如下步驟：

1)對照品溶液的制備：取沒食子酸、原兒茶酸、5-羥甲基糠醛、馬錢苷、莫諾苷適量置于容量瓶中，以乙醇或50～100％的甲醇溶解定容；

2)供試品溶液的制備：分別取炮制前的山茱萸藥材和炮制過程中山茱萸飲片打粉(過三號篩)，精密稱取適量，精密量取乙醇或50％～65％甲醇，稱定重量，回流或超聲，冷卻后以同種溶劑補足重量，搖勻，過0.45μm膜備用即可；

3)HPLC指紋圖譜的建立：

分別吸取步驟1)和2)所得的對照品和供試品溶液，分別注入高效液相色譜儀進行含量檢測：

其中，色譜條件為：色譜柱為反相色譜柱C₁₈，紫外檢測器，檢測波長為230nm～250nm，柱溫為30℃～40℃，流動相為乙腈-0.05％～0.2％磷酸溶液，梯度洗脫；流速為1.0ml/min，分析時間為100min；所述梯度洗脫順序表如下：

表1 梯度洗脫順序表

4)以馬錢苷為參照峰的標準指紋圖譜的制定

吸取步驟2)所得的山茱萸對照品溶液和山茱萸供試品溶液各10μl，分別注入高效液相色譜儀中，照高效液相色譜法測定，記錄色譜圖；依據所得的10～15批山茱萸藥材的指紋圖譜、10～15批山茱萸飲片的指紋圖譜，制定山茱萸藥材標準指紋圖譜和飲片標準指紋圖譜；其中所述標準指紋圖譜具有14個特征峰，其中8號峰為馬錢苷；

5)指紋圖譜的質量控制

將山茱萸原藥材與其分別對應的山茱萸飲片的指紋圖譜與步驟4)制定的標準指紋圖譜進行比較，計算相似度，識別所具有的共同吸收峰的數量，確定相似度。

2.根據權利要求書1所述的指紋圖譜建立方法，其特征在于：所述步驟1)對照品溶液的制備，按照下述方法進行，分別稱取沒食子酸對照品15.03mg、原兒茶酸對照品10.31mg、5-羥甲基糠醛對照品10.12mg、馬錢苷對照品5.78mg、莫諾苷對照品6.32mg，置于100ml容量瓶中，加乙醇或50～65％甲醇，超聲溶解并定容至刻度，搖勻，制成對照品溶液。

3.根據權利要求1所述的指紋圖譜建立方法，其特征在于：所述步驟2)的供試品溶液的制備按照下面的方法進行；

分別取炮制前的山茱萸藥材和炮制過程中山茱萸飲片(過三號篩)0.1～0.5g，精密量取乙醇或50％～65％甲醇20～50ml，稱定重量，超聲或回流45～90min，冷卻后以甲醇補足重量，搖勻，過0.45μm膜備用即可。

4.根據權利要求1所述的指紋圖譜建立方法，其特征在于所述步驟(3)中的色譜柱是柱長為250mm反相色譜柱，檢測波長為240nm。

5.根據權利要求1所述的指紋圖譜建立方法,其特征在于所述步驟3)中流動相為乙腈-0.1％磷酸溶液。

6.根據權利要求1所述的指紋圖譜建立方法,其特征在于所述步驟1)和2)中甲醇濃度為50％。

7.根據權利要求1-3中任一項權利要求所述的指紋圖譜建立方法，其特征在于：所述步驟2)中超聲處理時間為45分鐘。