[發明專利]快速鑒別豬圓環病毒1型、2型和3型的HRM檢測引物、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201711456099.6
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107916303A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發明（設計）人: 潘玉
• 申請（專利權）人: 廣州維佰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙)44467
• 代理人: 王海曼

1.一種快速鑒別豬圓環病毒1型、2型和3型的，其特征在于，其核苷酸序列如下所示：

上游引物P1：5’-GTTGCVGAGMAGHTCCCTG-3’(SEQ ID NO：1)；

下游引物P2：5’-CCATTGTAACCATCCCACCA-3’(SEQ ID NO：2)。

2.一種快速鑒別豬圓環病毒1型、2型和3型的HRM檢測試劑盒，其特征在于：該試劑盒含有權利要求1所述的HRM檢測引物。

3.一種快速鑒別豬圓環病毒1型、2型和3型的HRM檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)從樣品中提取病毒核酸；

2)以核酸為模板，利用權利要求1所述的引物對P1和P2以及熒光飽和染料，進行PCR擴增反應獲得擴增產物；

3)對擴增產物進行HRM分析，確定病毒類型；上述方法用于非疾病的診斷和治療。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2)中PCR擴增的反應體系為：

加ddH₂O補至20ul。

5.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于，步驟2)中PCR擴增反應程序如下：94℃預變性5min；94℃變性30s、55℃退火30s、72℃延伸20s，循環35次；72℃終延伸10min。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟3)HRM分析過程中，80℃到95℃以每0.3℃/步的速率進行熔解曲線分析。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：步驟3)中HRM分析的具體分析過程為：在80～95℃熔解溫度范圍內，若待檢測樣品熔解曲線有兩個熔解峰，則判定待檢測樣品為豬圓環病毒3型；如果若待檢測樣品熔解曲線在85～86℃出現一個熔解峰時，則判定待檢測樣品為豬圓環病毒2型；如果若待檢測樣品熔解曲線在87～88℃出現一個熔解峰時，則判定待檢測樣品為豬圓環病毒1型。