[發明專利]膠質瘤診斷標志物circ1:29154696|29154910及應用

有效

• 申請號: 201711453836.7
• 申請日: 2017-12-28
• 公開（公告）號: CN107937534B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 武明花;湯穎;李沛瑤;趙春花;劉洋;劉慶;袁健
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明屬于生物技術領域，公開了膠質瘤診斷標志物circ1:29154696|29154910及應用。在本發明中，首次發現膠質瘤患者血清外泌體中circ1:29154696|29154910的表達水平相比于對照組明顯升高(p＝0.01)，ROC分析則顯示其對膠質瘤具有較高診斷價值(AUC＝0.911，P＝0.002，靈敏度和特異性分別為75％和98％)。因此通過檢測膠質瘤患者血清外泌體中circ1:29154696|29154910的表達水平，可對膠質瘤患者做出早期、快速的無創性診斷。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于膠質瘤診斷的血清circRNA標志物circ1:29154696|29154910以及檢測該標志物的試劑用于制備膠質瘤診斷制劑的應用、還有試劑盒。

背景技術

腦膠質瘤是成年人最為頻發的腦腫瘤疾病，占顱內腫瘤的40.49％。從確診開始，腦膠質瘤患者平均生存壽命不超過五年。為了診治膠質瘤這種與遺傳物質相關性極高的惡性疾病，必須在分子生物學水平，從遺傳信息表達的方面來探索其發病機理。目前而言膠質瘤的診斷和治療方法雖處于不斷改進階段，但是膠質瘤患者生存率并沒有明顯提高。膠質瘤診斷仍然處于以臨床、病理學和影像學信息為基礎的經驗性階段，而且一經診斷，絕大多數均為中晚期，手術后的生存率不容樂觀。因此，尋找膠質瘤診斷標志物對高危人群進行篩查，并相應地選擇合理的后續治療方案，提高生存率，是神經科學領域亟待解決研究任務。

環狀RNA是一類廣泛且多樣地存在于哺乳動物細胞中、具有調控基因表達作用的內源性非編碼RNA分子，具有共價閉合的環形結構，廣泛存在于各種細胞中，也是繼microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究熱點。近年來，隨著深度測序技術的廣泛應用和生物物理和信息學技術的快速發展，人們發現人類許多外顯子的轉錄本可被非線性地反向剪接或通過基因重排而形成環狀RNA，且它們在所有剪接轉錄本中占了相當大的比例。近年來也逐漸發現外泌體中也含有大量的環狀RNA，可能發揮重要作用。外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm)，現今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體首次于綿羊網織紅細胞中被發現，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。近年研究顯示，外泌體是細胞與細胞間通訊的重要的分子，參與諸多生理與病理過程。外泌體中不僅包含蛋白質成分，還包括一些RNA成分，如微小RNA(micro RNA，miRNA)、長鏈非編碼RNA和mRNA、環狀RNA(circular RNA，circRNA)。外泌體所攜帶的這些RNA統稱為外泌體來源RNA，具有完整的序列結構和生物活性，有望作為液體活檢分子標志物，在精準醫學發展上有著光明的前景。

發明內容

本發明的第一個目的是：提供一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物。

主要內容包括：一種用于膠質瘤診斷的血清外泌體circRNA標志物circ1:29154696|29154910，其序列如SEQ NO:1所示。該circRNA位于人類的第1號染色體上，全長215bp。

本發明的第二個目的是，提供檢測所述的circRNA標志物在血清外泌體中表達量的試劑在制備膠質瘤診斷制劑中的應用。

本發明的第三個目的是，提供一種膠質瘤診斷試劑盒，其能夠測定血清外泌體中的circ1:29154696|29154910的含量。

所述的膠質瘤診斷試劑盒，含有檢測circ1:29154696|29154910含量的PCR引物。優選引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的膠質瘤診斷試劑盒，除circ1:29154696|29154910的引物外，還含有從血清中提取外泌體、由外泌體中提取RNA并進行逆轉錄及熒光定量PCR的所有試劑。

包括：