[發(fā)明專利]具有表面蛋白簡化糖基化的病毒顆粒的生產方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711437066.7 | 申請日： | 2011-11-04 |
| 公開（公告）號： | CN108165534A | 公開（公告）日： | 2018-06-15 |
| 發(fā)明（設計）人： | 翁啟惠;馬徹;曾勇杰 | 申請（專利權）人： | 中央研究院 |
| 主分類號： | C12N7/00 | 分類號： | C12N7/00;A61K39/145;A61K39/12;A61P31/16 |
| 代理公司： | 上海一平知識產權代理有限公司 31266 | 代理人： | 崔佳佳;劉妍珺 |
| 地址： | 中國臺灣臺北市*** | 國省代碼： | 中國臺灣;71 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 表面蛋白 病毒顆粒 單糖基化 糖基化 生產 流感病毒顆粒 糖基化抑制劑 流感病毒 病毒 敏感性降低 保守性質 糖基化譜 疫苗生產 靶標 位點 突變 疫苗 | ||
1.一種用于生產單糖基化流感病毒的方法，所述方法包括：
a)在具有有效量甘露糖苷酶抑制劑的適合宿主中培養(yǎng)含有血凝素HA抗原的流感病毒，其中所述甘露糖苷酶抑制劑的濃度足以抑制N-糖基化途徑中的α-甘露糖苷酶I，其中適合宿主是無特異病原的(SPF)含胚雞蛋；
b)回收步驟a)中生產的流感病毒；
c)將步驟b)中回收的流感病毒接觸內切糖苷酶Endo H，以生產具有單糖基化HA抗原的流感病毒，其中Endo H的濃度足以除去高甘露糖型聚糖；和
d)分離所述的具有單糖基化HA抗原的流感病毒。
2.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述HA抗原源自高致病性H5N1流感病毒。
3.根據(jù)權利要求2的方法，其中所述高致病性H5N1流感病毒是NIBRG-14。
4.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述甘露糖苷酶抑制劑是基夫堿Kif。
5.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述甘露糖苷酶抑制劑是脫氧甘露糖野尻霉素(DMJ)。
6.根據(jù)權利要求1的方法，其中α-甘露糖苷酶I的抑制產生帶有Man9(GlcNAc)2的糖蛋白。
7.根據(jù)權利要求4的方法，其中向無特異病原的(SPF)含胚雞蛋的尿囊腔中添加基夫堿。
8.根據(jù)權利要求7的方法，其中以0.005至0.5mg/ml的濃度添加基夫堿。
9.根據(jù)權利要求1的方法，其中通過孵育足以生長所述流感病毒的時間來進行步驟b)；然后分離包含所述流感病毒的SPF含胚雞蛋的尿囊液。
10.根據(jù)權利要求9的方法，其中在步驟c)中，Endo H的濃度為0.1至100μg/mL。
11.根據(jù)權利要求9的方法，其中通過包括密度梯度超速離心的方法進行步驟d)。
12.根據(jù)權利要求1的方法，其還包括通過包括超濾的方法純化具有所述單糖基化流感病毒HA抗原的流感病毒。
13.根據(jù)權利要求12的方法，其中所述超濾包括使用0.2μm濾器。
14.根據(jù)權利要求1的方法，其還包括通過電子顯微鏡分析具有所述單糖基化流感病毒HA抗原的流感病毒。
15.根據(jù)權利要求1的方法，其還包括通過包括PNGase處理的方法量化具有所述單糖基化流感病毒HA抗原的流感病毒。
16.根據(jù)權利要求1的方法，其還包括通過包括SDS-PAGE電層析的方法量化具有所述單糖基化流感病毒HA抗原的流感病毒。
17.根據(jù)權利要求1的方法，其還包括通過包括質譜的方法分析具有所述單糖基化流感病毒HA抗原的流感病毒的聚糖組成。
18.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述流感病毒HA抗原選自單糖基化流感病毒HI、H3和H5組成的組。
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