[發明專利]攜帶嵌合抗原受體的免疫細胞外泌體的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201711432948.4
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN108315305B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 胡適;傅文燕
• 申請（專利權）人: 灃潮醫藥科技（上海）有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00;A61P31/00;A61P37/02
• 代理公司: 上海順華專利代理有限責任公司 31203
• 代理人: 陸林輝

本發明涉及生物醫藥領域，具體是一種利用分離獲得攜帶CAR的免疫細胞外泌體的制備方法及其應用。具體是將CAR免疫細胞以特異性的抗原活化后，產生的外泌體進行進一步的分析、分離、純化、富集，最終得到攜帶CAR的免疫細胞外泌體。本發明制備的外泌體能用于各種疾病的治療，如癌癥，重型傳染病等，且這種外泌體具克服CAR細胞治療的免疫炎癥風暴等不良反應，增強了CAR的組織浸透能力，還具有保存和運輸方便的優勢，為相關疾病的治療提供了新的策略。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體地說，是一種利用分離獲得含嵌合抗原受體(Chimeric Antigen Receptor，CAR)外泌體的制備方法及其治療疾病的應用。

背景技術

以手術治療、放射治療及化學治療為主，輔以新型的靶向治療方案是近年來對惡性腫瘤治療的基本策略，且已經在臨床實踐中取得重要的進展。但惡性腫瘤的復發、轉移和治療性耐受依然是一直困擾臨床和科研工作者的難題。近年來，基因修飾各種免疫細胞用于治療疾病的方法已經提出，如通過嵌合抗原受體(Chimeric Antigen Receptor，CAR)在T細胞上的表達，使得基因修飾的T細胞靶向腫瘤細胞上表達的抗原，以治療癌癥類疾病。這類的治療方式已經獲得一定程度上的成功，第一個類似的產品也與2017年或FDA批準(Brentjens R,et al.Treatment of chronic lymphocytic leukemia with geneticallytargeted autologous T cells:case report of an unforeseen adverse event in aphase I clinical trial，Molecular Therapy,2010,18(4):666-668.)隨著目前技術的發展，目前嵌合抗原受體細胞技術中嵌合抗原受體基因構建的方式主要劃分以下三代。第一代CAR的基因工程技術由胞外結合區-單鏈抗體(Single-chain fragment variable，scFv)、跨膜區(Transmembrane Region，TM)和胞內信號區-免疫受體酪氨酸活化基序(immuno-receptor tyrosine-based activation motif，ITAM)組成，其中嵌合抗原受體CAR部分按照如下形式連接：svFv-TM-CD3ζ(Zhang T,Barber A,Sentman C L.ChimericNKG2D–Modified T Cells Inhibit Systemic T-Cell Lymphoma Growth in a MannerInvolving Multiple Cytokines and Cytotoxic Pathways[J].Cancer research,2007,67(22):11029-11036.)。隨后發展的第二代CAR基因工程策略在一代的基礎上增加了CD28或CD137(又名4-1BB)的胞內信號區，其中嵌合抗原受體各部分按照如下形式連接：scFv-TM-CD28-ITAM或scFv-TM-CD137-ITAM。胞內信號區發生的B7/CD28或4-1BBL/CD137共刺激作用引起T細胞等免疫細胞的持續增殖，并能夠提高T細胞分泌IL-2等細胞因子的水平(Savoldo B,et al.CD28 costimulation improves expansion and persistence ofchimeric antigen receptor–modified T cells in lymphoma patients.The Journalof clinical investigation,2011,121(5):1822.)。近年來發展的第三代CAR基因工程連接如下：scFv-TM-CD28-CD137-ITAM或scFv-TM-28-CD134-ITAM，進一步提高CAR-T在體內的存活周期和效果(Carpenito C,et al.Control of large,established tumorxenografts with genetically retargeted human T cells containing CD28andCD137domains.Proceedings of the National Academy of Sciences,2009,106(9):3360-3365.)。除了最常用的T細胞，近年來也涌現出利用CAR技術制備其他免疫細胞類型的治療方法，如CAR-NK[Chu J,et al.CS1-specific chimeric antigen receptor(CAR)-engineered natural killer cells enhance in vitro and in vivo antitumoractivity against human multiple myeloma.Leukemia,2014,28(4):917-927.]等。