[發明專利]一種固定化菌藻微球的制備方法

有效

• 申請號: 201711429429.2
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN107974411B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 周燕;王建泉;周潔
• 申請（專利權）人: 安徽仁維環保工程科技有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N1/20;C12N1/16;C12N11/14;C12N11/10;C02F3/34;C12R1/89;C12R1/10;C12R1/72
• 代理公司: 阜陽翰邦知識產權代理事務所(普通合伙) 34156
• 代理人: 尹杰

1.一種固定化菌藻微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、在無菌操作條件下，將小球藻以1×10⁶個/mL-1×10⁷個/mL的接種量接種到培養基中，在溫度為25-27℃，轉速為110-130轉/分鐘條件下，光照黑暗循環交替培養60-75小時，得到微藻培養液；

S2、將S1中得到的微藻培養液的pH值調整為4.5-6，加入檸檬酸鈉，攪拌20-30分鐘，加入氯化鈣，攪拌40-50分鐘，以2000-2200轉/分鐘的轉數離心分離，得到微藻液；

S3、將地衣芽孢桿菌以5×10⁷個/mL-8×10⁷個/mL的接種量接種到質量分數為1%-3%的葡萄糖水溶液中，在25-35℃培養40-60分鐘，得到地衣芽孢桿菌培養液；

S4、將產朊假絲酵母菌以1×10⁶個/mL-3×10⁶個/mL的接種量接種到質量分數為0.3%-0.7%的葡萄糖水溶液中，在30-40℃培養20-30分鐘，得到產朊假絲酵母菌培養液；

S5、將S2中制備的微藻液、S3中制備的地衣芽孢桿菌培養液和S4中制備的產朊假絲酵母菌培養液混合均勻，得到混合菌液；

S6、配制含海藻酸鈉和氯化鎂的載體溶液，將S5中得到的混合菌液加入到載體溶液中，混合均勻后用注射器滴入質量分數為2.6%-3.2%的氯化鈣溶液中，在8-10℃固定2-2.5小時后取出，用去離子水脫鹽1-2小時，得到固定化菌藻微球。

2.根據權利要求1所述的一種固定化菌藻微球的制備方法，其特征在于，所述S1中培養基的原料按照重量份包括：1-2份葡萄糖、4-6份淀粉糖、0.01-0.03份硫酸鋅、0.1-0.3份硫酸鎂、0.15-0.3份硫酸銨、0.2-0.4份磷酸二氫鉀、0.1-0.3份硝酸鈉、9-12份氯化鈉和240-260份去離子水。

3.根據權利要求1所述的一種固定化菌藻微球的制備方法，其特征在于，所述S1光照黑暗循環交替培養中，在光照環境下培養的時間為8-10小時，光照強度為3500-3800Lux，在黑暗環境下培養的時間為11-13小時，光照環境、黑暗環境循環交替進行。

4.根據權利要求1所述的一種固定化菌藻微球的制備方法，其特征在于，所述S2中將微藻培養液的pH值調整為5.1-5.4。

5.根據權利要求1所述的一種固定化菌藻微球的制備方法，其特征在于，所述S2中加入檸檬酸鈉的量為微藻培養液重量的1.0%-2.5%。

6.根據權利要求1所述的一種固定化菌藻微球的制備方法，其特征在于，所述S2中加入檸檬酸鈉的量為微藻培養液重量的1.5%-1.7%。

7.根據權利要求1所述的一種固定化菌藻微球的制備方法，其特征在于，所述S2中加入氯化鈣的量為微藻培養液重量的3%-5%。

8.根據權利要求1所述的一種固定化菌藻微球的制備方法，其特征在于，所述S2中加入氯化鈣的量為微藻培養液重量的3.8%-4.3%。

9.根據權利要求1所述的一種固定化菌藻微球的制備方法，其特征在于，所述S6中載體溶液中含有質量分數為2%-3%的海藻酸鈉和質量分數為0.6-0.8%的氯化鎂。

10.根據權利要求1所述的一種固定化菌藻微球的制備方法，其特征在于，所述S6中使用的載體溶液的量為微藻液重量的2.3-2.7倍。