[發明專利]一種葡萄籽原花青素的提取方法

有效

• 申請號: 201711424727.2
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN108003128B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 石清東;王正元;陳赫巖;王姣
• 申請（專利權）人: 北京頤方生物科技有限公司
• 主分類號: C07D311/62
• 分類號: C07D311/62;A61P3/10;A61P39/06;A23L33/105
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;姚自奇

本發明涉及一種葡萄籽原花青素的提取方法。本發明克服了葡萄籽種皮中原花青素難以溶出及其提取物中原花青素聚合度高的難題，采用黑曲霉為菌種發酵葡萄籽，利用黑曲霉產生的纖維素酶、果膠酶等酶類降解葡萄籽種皮利于原花青素的溶出，采用不同體積分數的乙醇作為解吸液洗脫大孔吸附樹脂，將原花青素分級，然后進行部分酸解，以利于增加提取物中原花青素低聚體的含量。本發明所得的提取物中低聚原花青素含量≥98％，其平均聚合度在2.5～3.0之間，在體內易吸收，抗氧化活性強。

技術領域

本發明屬于天然產物活性物質提取領域，具體涉及一種葡萄籽原花青素的提取方法。

背景技術

原花青素(proanthocyanidins)又稱為縮合單寧(condensed tannins)，是黃烷-3醇單體通過C4-C8或C4-C6位連接成一定聚合度的分子，存在形式為游離、寡聚和多聚物，其基本單元主要是兒茶素、表兒茶素、沒食子酸及表兒茶素沒食子酸酯等。按聚合度大小可分為低聚原花青素(簡稱OPC，基本單元的二、三、四聚體)和高聚原花青素(簡稱PPC，基本單元的聚合度大于4)。其中低聚原花青素可被人體吸收利用，且具有比其組成單元更高的抗氧化活性；高聚原花青素難以透過生物膜，不能被人體吸收利用，因此降低葡萄籽提取物中原花青素的聚合度可增加提取物的吸收利用率。

原花青素廣泛分布于葡萄籽、松樹皮等高等植物組織中。在植物體中原花青素具有抗生物或非生物脅迫的功能，如抗紫外線、抗病以及調節種子休眠和萌發等。一系列研究表明原花青素是一種強的抗氧化劑，其抗氧化、清除自由基的能力是VE的50倍、VC的20倍。從食品中攝取原花青素可以延緩衰老，預防動脈粥樣硬化和心血管疾病如心臟病、心血管病、高血壓，而且對糖尿病、帕金森病、肥胖癥和癌癥等有一定的藥理功效?，F已廣泛應用于食品、化妝品和保健品等領域。

葡萄籽提取物作為一種天然存在的強效抗氧化劑，具有顯著清除人體自由基的功能，其應用已經有40多年的歷史，到上個世紀90年代歐美等發達國家對葡萄籽提取物的應用與開發成為熱點。在此潮流的影響下，國內相關的研究也逐漸展開，近年來國內以葡萄籽提取物為原料的保健食品越來越多。由于葡萄籽提取物中功效成分含量太復雜，而且各葡萄籽提取物原料生產廠家和應用廠家對葡萄籽提取物中功效成分的認識不統一。但目前國內廠家對自己葡萄籽提取物的標注多為原花青素含量≥95％，未提到原花青素聚合度及單體的含量，經測定其產品原青花素的平均聚合度較大，一般都在8.0以上。

中國專利CN105130941A公開了一種葡萄籽提取物的制備方法，采用粉碎后的葡萄籽添加水和酵母后密封發酵，然后再用丙烷和二甲醚萃取葡萄籽油，用無水乙醇作為萃取劑進行亞臨界萃取，獲得原花青素提取物。中國專利CN101100464A中公開了高氧化自由基吸收能力(ORAC)的低聚原花青素及其提純方法，所述的低聚原花青素產品含有質量百分數為45～65％的低聚原花青素，其制備方法為采用超濾膜截留相對分子量在5～100萬之間的分子，制得高ORAC值的低聚原花青素。中國專利CN103910706B公開了一種低成本的低聚原花青素的制備方法，其采用冷溶、過濾、納濾、噴霧干燥等技術，在其制備過程中采用質量濃度為4～6％的亞硫酸氫鈉溶液，進行高聚原花青素的降解，取得了一定的效果。中國專利CN200510013084.3通過用截留相對分子量為5000和1000的低蛋白吸附的改性聚醚砜平板超濾膜，提純葡萄籽提取物中的低聚原花青素，其中5000膜超濾原花青素得率為25.18％，單體兒茶素得率為74.11％；1000膜超濾原花青素得率為34.76％，單體兒茶素得率為48.58％。中國專利CN104529990A公開了一種從葡萄籽中提取原花青素的方法，其采用纖維素酶進行葡萄籽中纖維素的降解以利于種皮中原花青素溶出，得到純度95％以上的寡聚原花青素。

在上述文獻中所涉及的原花青素的提取方法中，采用酶進行纖維素的降解以利于原花青素的溶出，其成本投入較高，而且在酶解過程中需要適宜酶解的溫和條件，操作較為復雜。采用超濾膜過濾提取特定分子段的原花青素過程中，目前仍還存在膜通量小、所需膜面積大、處理量少、超濾時間長、難以實現規?；I生產等缺陷。

發明內容