[發(fā)明專利]一種靶向CD22的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細胞及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711421690.8
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN109957018A
• 公開（公告）日: 2019-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張宏玲;龍麗梅;鐘春穎
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳賓德生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

本發(fā)明提供了一種靶向CD22的單鏈抗體，所述靶向CD22的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD22的單鏈抗體為人源化單鏈抗體。本發(fā)明還提供了一種包括所述靶向CD22的單鏈抗體的嵌合抗原受體T細胞，所述靶向CD22的嵌合抗原受體可以專一性地靶向CD22，尤其可以靶向到不表達CD19的腫瘤細胞，促進T細胞在患者體內(nèi)的擴增，高效且特異性的殺傷腫瘤細胞。此外，人源化單鏈抗體制得的靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞具有更好的維持細胞的活力和殺傷力。本發(fā)明還提供了一種靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞的制備方法和應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學生物領(lǐng)域，特別涉及一種靶向CD22的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細胞及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

CAR-T(嵌合抗原受體T細胞)技術(shù)是一種新型細胞療法，它是將經(jīng)過CAR改造的T細胞回輸至人體，激活自身免疫系統(tǒng)，對腫瘤細胞進行殺傷，在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治療上有著顯著的療效，被認為是目前最有效的惡性腫瘤的治療方式之一。

目前CAR-T技術(shù)在CD19陽性血液瘤(如B細胞淋巴瘤、急慢性B淋巴細胞白血病)中取得了令人矚目的效果。但由于同類的腫瘤常表達各不相同的免疫表型，舉例來說，當腫瘤細胞出現(xiàn)CD19陰性逃逸，即，存在不表達CD19的腫瘤細胞，則CD19靶點失效，而CART-CD19無法再發(fā)揮抗腫瘤效果，因此，有必要提供能靶向惡性腫瘤的其他廣泛表達靶點的CAR-T細胞。此外，CAR-T細胞的在體維持能力(persistence)是CAR-T長期療效的保證，但實際上CAR-T在回輸后幾天到幾周就完全消失，而未能發(fā)揮長效持久的殺傷腫瘤細胞的能力。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種靶向CD22的單鏈抗體，以及包括所述靶向CD22的單鏈抗體的嵌合抗原受體T細胞。所述靶向CD22的嵌合抗原受體可以專一性地靶向CD22，促進T細胞在患者體內(nèi)擴增，高效且特異性地殺傷腫瘤細胞，同時帶人源化單鏈抗體的靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞能夠持久地維持其自我更新活力和殺傷力。本發(fā)明還提供了一種靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞的制備方法和應(yīng)用。

第一方面，本發(fā)明提供了一種靶向CD22的單鏈抗體，所述靶向CD22的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD22的單鏈抗體為人源化單鏈抗體。

可選的，所述靶向CD22的單鏈抗體的編碼基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

可選的，所述靶向CD22的單鏈抗體編碼基因應(yīng)該考慮簡并堿基，即如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的編碼基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保護范圍還應(yīng)該保護與SEQ ID NO:2具有堿基簡并性質(zhì)的核苷酸序列，這些核苷酸序列對應(yīng)的氨基酸序列仍然為SEQ ID NO:1。

本發(fā)明第一方面提供的所述靶向CD22的單鏈抗體能夠與CD22蛋白發(fā)生特異性結(jié)合，尤其可以靶向到不表達CD19的腫瘤細胞。此外，所述靶向CD22的單鏈抗體為人源化單鏈抗體，可以避免引起人機體的免疫反應(yīng)。

第二方面，本發(fā)明提供了一種靶向CD22的嵌合抗原受體T細胞，包括靶向CD22的嵌合抗原受體CAR-CD22，所述CAR-CD22包括從氨基端到羧基端順次連接的靶向CD22的單鏈抗體、胞外鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)信號區(qū)的氨基酸序列，其中所述靶向CD22的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

其中，所述“從氨基端到羧基端順次連接”具體為：所述靶向CD22的單鏈抗體的氨基酸序列的羧基端與所述鉸鏈區(qū)的氨基酸序列的氨基端相連，所述胞外鉸鏈區(qū)的氨基酸序列的羧基端與所述跨膜區(qū)的氨基酸序列的氨基端相連，所述跨膜區(qū)的氨基酸序列的羧基端與所述胞內(nèi)信號區(qū)的氨基酸序列的氨基端相連。