[發(fā)明專利]一種美容護膚的干細(xì)胞制劑的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711421364.7
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN108057014A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 段海峰
• 申請（專利權(quán)）人: 北京匯智馳康生物科技有限公司
• 主分類號: A61K8/98
• 分類號: A61K8/98;A61Q19/00;C12N5/0775
• 代理公司: 北京創(chuàng)遇知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11577
• 代理人: 李芙蓉;孫進華

1.一種美容護膚的干細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

步驟A：分離間充質(zhì)干細(xì)胞；

步驟B：將所述間充質(zhì)干細(xì)胞傳代培養(yǎng)培養(yǎng)至8-15代；

步驟C：收集步驟B中獲得的干細(xì)胞，用培養(yǎng)基培養(yǎng)，并用無菌PBS清洗后，用富含氨基酸的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；

步驟D：收集步驟C中干細(xì)胞培養(yǎng)液中的干細(xì)胞和上清液的混合物；

步驟E：超聲裂解所述干細(xì)胞及上清液的混合物，離心分離獲得上清液；

步驟F：將步驟E獲得的上清液加入抗氧化劑，過濾除菌獲得干細(xì)胞制劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容護膚的干細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，

所述步驟C中，所述培養(yǎng)基為低糖型DMEM培養(yǎng)基，所述低糖型DMEM培養(yǎng)基含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)8％-15％的胎牛血清以及質(zhì)量濃度為15-25ug/L的堿性成纖維細(xì)胞生長因子。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容護膚的干細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，

所述步驟C中，所述富含氨基酸的培養(yǎng)液包括葡萄糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.08％-1.5％，核黃素質(zhì)量濃度為0.1-0.3mg/L，維生素B12的質(zhì)量濃度為0.004-0.006mg/L以及葉酸的質(zhì)量濃度為0.8-1.5mg/L，以及每種天然氨基酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.008％-0.15％；

所述天然氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、絲氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、蘇氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸和組氨酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容護膚的干細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，

所述抗氧化劑選自維生素a、維生素c、維生素e、還原型谷胱甘肽和過氧化物歧化酶中的一種或者多種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容護膚的干細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，

所述間充質(zhì)干細(xì)胞來源于擴脂肪組織、胎盤組織、骨髓、臍帶、臍帶血。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容護膚的干細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，

所述步驟C中，復(fù)蘇后的細(xì)胞培養(yǎng)2-4天后用富含氨基酸的營養(yǎng)液進行換液培養(yǎng)20-26小時。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的美容護膚的干細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，

所述制備方法還包括真空冷凍獲得干細(xì)胞制劑凍干粉的步驟，所述真空冷凍過程是將干細(xì)胞制劑通過預(yù)冷降溫、深度降溫、升華干燥、真空壓縮制得的。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的美容護膚的干細(xì)胞制劑的制備方法，其特征在于，

所述干細(xì)胞制劑凍干粉的凍干保護劑選自甘氨酸、精氨酸、氨基乙酸、右旋糖酐、海藻糖、殼聚糖和甘露醇中的一種或多種。