[發明專利]蛋白酶檢測用電化學傳感器及制備方法及檢測方法

有效

• 申請號: 201711421008.5
• 申請日: 2017-12-25
• 公開（公告）號: CN107843631B
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 夏寧;劉林;趙豐;鄧德華
• 申請（專利權）人: 安陽師范學院
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 鄭州立格知識產權代理有限公司 41126
• 代理人: 田磊;賀保平

1.蛋白酶檢測用電化學傳感器的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

A：多肽-石墨烯復合物的制備：將石墨烯納米片與芘丁標記的多肽溶液超聲混合30分鐘，所述的多肽的序列特征是：所述的多肽能夠被對應的蛋白酶切割，切割位點往碳端方向的第三個氨基酸是組氨酸，第四個氨基酸是側鏈上修飾了芘丁基團的賴氨酸，離心棄除上層剩余的多肽，然后用磷酸緩沖溶液將所得到的多肽-石墨烯復合物離心洗滌3次，于4 ℃下保存備用；

B：電化學傳感器的制備：將步驟A中制備得到的芘丁標記的多肽-石墨烯復合物多用磷酸緩沖溶液震蕩分散，取出5微升混合液滴加到直徑為3 mm的玻碳電極表面，自然晾干，得到電化學傳感器。

2.蛋白酶檢測的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

1：電化學傳感器的制備，包括以下子步驟：

1.1：多肽-石墨烯復合物的制備：將石墨烯納米片與芘丁標記的多肽溶液超聲混合30分鐘，所述的多肽的序列特征是：所述的多肽能夠被對應的蛋白酶切割，切割位點往碳端方向的第三個氨基酸是組氨酸，第四個氨基酸是側鏈上修飾了芘丁基團的賴氨酸，離心棄除上層剩余的多肽，然后用磷酸緩沖溶液將所得到的多肽-石墨烯復合物離心洗滌3次，于4℃下保存備用；

1.2：電化學傳感器的制備：將步驟A中制備得到的芘丁標記的多肽-石墨烯復合物多用磷酸緩沖溶液震蕩分散，取出5微升混合液滴加到直徑為3 mm的玻碳電極表面，自然晾干，得到電化學傳感器；

2：蛋白酶的檢測：

將步驟1得到的電極浸泡于待檢測的蛋白酶溶液中，取出后用二次水沖洗干凈，再在包含50μM 硫酸銅的磷酸緩沖溶液中進行循環伏安掃描測試，所述的磷酸緩沖溶液濃度為0.2M，pH值為 7.4。

3.根據權利要求2所述的蛋白酶檢測的檢測方法，其特征在于：循環伏安掃描采用三電極體系，步驟1得到的電化學傳感器為工作電極，飽和的Ag/AgCl電極為參比電極，Pt電極為輔助電極。