[發明專利]樟樹葉煙用香料的制備方法

在審

• 申請號: 201711409601.8
• 申請日: 2017-12-23
• 公開（公告）號: CN107955710A
• 公開（公告）日: 2018-04-24
• 發明（設計）人: 彭天輝
• 申請（專利權）人: 尋烏縣綠之源生物科技有限公司
• 主分類號: C11B9/02
• 分類號: C11B9/02;C12N1/20;C12N1/16;C12N1/02;A24B3/12;C12R1/07
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1.一種樟樹葉煙用香料的制備方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：

(1)原料準備：

①選取樟樹葉作為原料、滅菌得到無菌樟樹葉備用；

②煙葉復合培養基的制備：將煙葉和水按1：5的比例混合后加熱至100℃，并保持1～2小時，過濾得到煙水，將煙水和微生物固體培養基按3：7～10的比例混合，制成煙葉復合培養基；

(2)產香微生物的篩選：

①取煙葉5～10g，加入到無菌蒸餾水中，從中取100～1000μl的液體，滴加到由步驟(1)得到的煙葉復合培養基上，以平板劃線分離或稀釋涂平板法，在有氧或厭氧條件下培養，長出菌落后，將煙葉復合培養基放到體視鏡下篩查，挑取10～50個酵母菌和/或芽孢桿菌的單菌落；

②將挑出的單菌落在煙葉復合培養基中分別進行小量擴增培養，將小量擴增培養得到的菌液與無菌樟樹葉混合，進行小試量的固體堆積發酵，然后對發酵好的樟樹葉采用水蒸氣蒸餾法進行提取，獲得發酵型樟樹葉提取物；

③將發酵型樟樹葉提取物稀釋后添加至香煙中，并通過卷煙加香評吸篩選所需的產香微生物，然后保存篩得的產香微生物的菌種；

(3)利用步驟(2)中得到的產香微生物與無菌樟樹葉混合，進行固體堆積發酵；

①將保存的產香微生物菌種活化：將所述產香微生物的菌種接種到固體PDA培養基上，置于20～37℃的恒溫培養箱中培養24～48h使其中的菌種活化，再將活化的菌種接種于PDA液體培養基中，于20～37℃恒溫培養24～48h得到的培養液，將所述培養液離心棄除上清液，所得到的沉淀用生理鹽水稀釋震蕩均勻，即得到的活化菌種液；

②利用活化菌種液進行固體堆積發酵；

(4)對步驟(3)得到的發酵好的樟樹葉采用水蒸氣蒸餾法進行提取，得到樟樹葉煙用香料；

其中，所述步驟(2)和步驟(4)中的水蒸氣蒸餾法為：將上述發酵好的樟樹葉，置于水蒸氣蒸餾裝置中，按發酵固體與純凈水質量比1：10～15的比例加入的純凈水，加熱至100℃，直至發酵固體與水的混合物開始沸騰，連續加熱2～10h，收集發酵型樟樹葉揮發油，利用95％的乙醇溶液按與揮發油質量比例100～1000：1稀釋揮發油，得到樟樹葉煙用香料；

所述步驟(2)和步驟(3)中的固體堆積發酵為：將產香微生物按照1：1～10的質量比接種到無菌樟樹葉中，放置于28～35℃的培養箱中發酵2～7天，得到發酵好的樟樹葉。

2.根據權利要求1所述的樟樹葉煙用香料的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的煙葉為自然陳化一年至兩年的煙葉。

3.根據權利要求1所述的樟樹葉煙用香料的制備方法，其特征在于：步驟(1)中所述的煙葉為白肋煙葉。