[發明專利]一種利用霸王柴無菌苗快速增殖培養無性系的方法

有效

• 申請號: 201711407323.2
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108077075B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 王昱淇;馬劍平;滿多清;劉克彪;高松濤
• 申請（專利權）人: 甘肅省治沙研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種利用霸王柴無菌苗快速增殖培養無性系的方法，包括以下步驟：

1)采用GA₃溶液和水對霸王柴種子依次進行浸泡，所述浸泡重復2次，得到浸泡種子；

2)將步驟1)得到的浸泡種子在體積濃度為75％的乙醇溶液中進行消毒，所述消毒的時間為40s，得到消毒種子；

3)將步驟2)得到的消毒種子在無菌苗培養基中進行無菌苗培養15～20d，得到無菌苗；

所述無菌苗培養基以改良MS培養基作為基本培養基，包括0.3mg/L的GA₃、5g/L的瓊脂和30g/L的蔗糖，pH值為5.8～6.0；

4)由所述步驟3)得到的無菌苗獲得外植體，將所述外植體在誘導愈傷組織培養基上進行誘導愈傷培養25～30d，得到愈傷組織；所述外植體包括莖段、葉片和/或胚軸；所述誘導愈傷培養基以改良MS培養基作為基本培養基，包括0.1～0.2mg/L的6-BA、0.3～0.5mg/L的NAA和30g/L的蔗糖，pH值為5.8～6.0；步驟4)所述誘導愈傷培養包括依次進行的暗培養、振蕩培養和光照培養，所述暗培養的時間為2d，暗培養后進行振蕩培養，所述振蕩培養為25℃、20r/min培養7d；振蕩培養后進行光照培養，所述光照培養的條件為：溫度25±2℃、光照強度1500～18001x、光照時間14h/d；

5)將所述步驟4)得到的愈傷組織在第一不定芽分化培養基中進行第一分化培養6～8d，再將所述第一分化培養產物在第二不定芽分化培養基中進行第二分化培養25～30d，得到不定芽；所述第一不定芽分化培養基以改良MS培養基作為基本培養基，包括3.0mg/L的KT、0.5mg/L的NAA和4.5g/L的瓊脂，pH值為5.8～6.0；所述第二不定芽分化培養基以改良MS培養基作為基本培養基，包括3.0mg/L的KT、0.5mg/L的NAA、20g/L的蔗糖和4.5g/L的瓊脂，pH值為5.8～6.0；

6)將所述步驟5)得到的不定芽在生根培養基中進行生根培養，得到霸王柴植株；所述生根培養基以改良MS培養基作為基本培養基，包括0.3mg/L的IBA和10g/L的蔗糖；

所述改良MS培養基為大量元素減少1/3的MS培養基。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)所述GA₃溶液中GA₃的質量濃度為100mg/L；所述水的溫度為40℃。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)采用GA₃溶液對霸王柴種子進行浸泡的時間為2h。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)采用水對霸王柴種子進行浸泡的時間為1h。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述消毒后，還包括沖洗種子的步驟，所述沖洗的次數為7～8次。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)所述無菌苗培養包括依次進行的暗培養和光照培養，所述暗培養的時間為2d，暗培養后進行光照培養，所述光照培養的條件為：溫度25℃、光照強度為1500～18001x、光照時間為12h/d。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟5)所述第一分化培養為暗培養，所述第一分化培養的時間為7d。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟5)所述第二分化培養為光照培養，所述光照培養的條件為：25±2℃、光照強度1500～18001x、光照時間14h/d。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟6)所述生根培養包括依次進行的暗培養和光照培養，所述暗培養的時間為4d，暗培養后進行光照培養，所述光照培養的條件為：溫度25℃、光照強度2000～22001x、光照時間14h/d。