[發明專利]一種HPLC-ELSD檢測阿維拉霉素預混劑的方法

有效

• 申請號: 201711405446.2
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN108152414B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 杜精精;馬曉雨;李金鐘;曹建全;杜石磊
• 申請（專利權）人: 河北圣雪大成制藥有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京集智東方知識產權代理有限公司 11578
• 代理人: 張紅;程立民

本發明提供了一種HPLC?ELSD檢測阿維拉霉素預混劑有關物質的方法，包括以下步驟：制備阿維拉霉素對照品溶液和樣品溶液、繪制標準曲線、采用HPLC?ELSD進行檢測、記錄峰面積、采用標準曲線法計算樣品中阿維拉霉素各組分峰及雜質峰的含量。本方法在公告方法的基礎上進行了改進，浸提溶劑由丙酮改為甲醇，降低了毒性和揮發性；樣品處理步驟簡化，效率更高；梯度洗脫條件優化后各峰之間的分離度提高，各成分計算更加準確，且流動相不需調pH值，節省時間，減少操作失誤的可能性；檢測器由紫外檢測器改為通用型蒸發光散射檢測器，檢測范圍更大，對雜質的監控更全面，更嚴格。

技術領域

本發明屬于成分檢測領域，涉及檢測阿維拉霉素有關物質的方法，具體的涉及一種HPLC-ELSD檢測阿維拉霉素預混劑有關物質的方法。

背景技術

阿維拉霉素是由綠色產色鏈霉菌Streptomyces viridochromogenes發酵產生的，屬于寡糖類抗生素。其組分有A到N共14種組分，其中阿維拉霉素A為主要組分，其生理活性最高，對梭菌、鏈球菌和桿菌的抑制效果特別高。其次為阿維拉霉素B。

中華人民共和國農業部公告第2253號發布的阿維拉霉素預混劑質量標準對各組分的要求如下：阿維拉霉素A峰應不低于60％，阿維拉霉素B峰應不高于18％，阿維拉霉素A+B應不低于70％，其他單一組分不得過6％。可見質量標準對“其他單一組分”的要求是最嚴格的。

“其他單一組分”既包括阿維拉霉素次要組分，也包括相關雜質。公告發布的有關物質檢測方法為高效液相色譜-紫外檢測法，要求雜質在選定的波長下(286nm)有紫外吸收方能檢出，這在一定程度上有漏檢雜質的風險。

蒸發光散射檢測器(ELSD)是一種通用型檢測器，消除了常見于傳統HPLC檢測方法中的難點，它不同于紫外和熒光檢測器，響應不依賴于樣品的光學特性，不受其官能團的影響，任何揮發性低于流動相的樣品均能被檢測，包括沒有紫外吸收的物質。ELSD的響應值與樣品的質量成正比，對所有樣品的檢測幾乎具有相同的響應因子，因而能用于測定樣品的純度或者檢測未知物。示差檢測器(RI)也是一種通用型檢測器，但靈敏度低，并與梯度洗脫不相容。質譜是另一種通用型檢測器，但昂貴的費用和操作復雜性限制了它的應用。

發明內容

為解決上述問題，本發明的目的是提供一種通用型檢測方法，能盡量多地檢測出樣品中所含雜質，有效監測各組分含量以嚴格控制產品質量。為此將ELSD的獨特檢測能力與HPLC的梯度洗脫分離能力相結合，并在原梯度條件基礎上進一步優化提高分離度，用于阿維拉霉素預混劑的有關物質檢測。

本發明為實現其目的采用的技術方案是，一種HPLC-ELSD檢測阿維拉霉素預混劑的方法，包括以下步驟：

a、制備阿維拉霉素對照品溶液和樣品溶液；

b、標準曲線繪制：將3-5份不同濃度的對照品溶液分別注入HPLC-ELSD進行測定，洗脫方式為梯度洗脫，記錄對照品色譜圖和峰面積；以A組分峰面積的對數值與相應A組分濃度值的對數進行線性回歸；

c、樣品測定與結果計算：將樣品溶液注入HPLC-ELSD進行測定，記錄色譜圖和峰面積，并以b步驟所得線性回歸方程分別計算樣品溶液色譜圖中A、B組分及雜質的含量百分比。

進一步地，HPLC-ELSD進行測定的色譜條件如下：

色譜柱：C185.0μm4.6*250mm；

柱溫：30-40℃；

進樣量：10-50μL；

流速：0.9-1.1mL/min；

漂移管溫度：115-130℃；

增益系數：1；

氣體流速：2.0-2.8L/min；