[發(fā)明專利]蠶蛹抗氧化肽的分離純化方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711402176.X
• 申請(qǐng)日: 2017-12-22
• 公開（公告）號(hào): CN108276471A
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董珊珊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海鹽縣凌特生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K1/14
• 分類號(hào): C07K1/14;C07K1/16;C07K1/18;C07K1/34;C07K1/36;C12P21/06
• 代理公司: 北京華識(shí)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11530
• 代理人: 趙永強(qiáng)

本發(fā)明公開了蠶蛹抗氧化肽的分離純化方法，該分離純化方法的具體步驟為：將蠶蛹蛋白酶解產(chǎn)物溶于雙蒸水中，離心后上清液即為蠶蛹抗氧化肽粗液；將蠶蛹蛋白肽液溶于雙蒸水，離心后上清液加入到離子交換樹脂層析柱，洗脫，收集對(duì)ACE抑制活性最好的抗氧化肽，即為離子交換層析酶解物；將離子交換層析酶解物溶于雙蒸水，離心后上清液經(jīng)過葡聚糖凝膠柱層析分離，用雙蒸水進(jìn)行洗脫，根據(jù)280nm下的吸光度曲線收集洗脫組分；將上述凝膠層析酶解物溶于雙蒸水，利用高效液相色譜進(jìn)行純化，即得蠶蛹抗氧化肽。有益效果為：本發(fā)明分離方法簡(jiǎn)單，可快速高效地分離出抗氧化肽，抗氧化肽得率高、損失低、純度高、活性不被破壞，得到的抗氧化肽對(duì)ACE抑制活性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多肽提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及蠶蛹抗氧化肽的分離純化方法。

背景技術(shù)

中國是著名絲綢古國，“絲綢之路”聞名與此，自古以來蠶桑業(yè)在中國的農(nóng)業(yè)中都是重要的部分，遠(yuǎn)在七千多年前我國就有養(yǎng)蠶抽絲的記載。目前，世界80%的產(chǎn)絲量都是由我國產(chǎn)出。蠶蛹蛋白是一種優(yōu)質(zhì)蛋白資源，蛋白質(zhì)的含量在干蠶蛹中高達(dá)50%左右，富含豐富的氨基酸，其中8種必需氨基酸占到總量45%左右，而必需氨基酸和非必需氨基酸是合理的，平衡的，其質(zhì)量比為0.73，符合世界衛(wèi)生組織/聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織（WHO/FAO）提出的參考蛋白模式，所以蠶蛹蛋白具有十分高的營養(yǎng)價(jià)值。我國是一個(gè)養(yǎng)蠶大國，平均每年新鮮蠶蛹的產(chǎn)量可達(dá)50萬噸，蠶蛹中的蛋白比很多畜禽類的必需氨基酸含量高，其中富含具有可以促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育、提高免疫力以及補(bǔ)充生物機(jī)體營養(yǎng)等功能的很多營養(yǎng)物質(zhì)，具有巨大的市場(chǎng)潛力。但是由于我國長(zhǎng)期以來對(duì)蠶蛹方面的加工利用率低下，除了干蠶蛹粉碎后應(yīng)用于畜禽飼料和營養(yǎng)源添加外，甚至有些蠶蛹被當(dāng)做肥料或者直接廢棄掉，因此，造成了巨大的資源浪費(fèi)。

隨著社會(huì)的技術(shù)和桑蠶生產(chǎn)的增加，蠶蛹和深入的研究和開發(fā)的綜合利用已成為必須解決的問題。隨著科技的發(fā)展，人們對(duì)蠶蛹蛋白的研究將更加多樣化，將不斷的開發(fā)出蠶蛹蛋白在食品（例如酸性飲料、肽類保健品、蠶蛹生抽等）、醫(yī)藥、化工、農(nóng)業(yè)等行業(yè)更多應(yīng)用，滲透到各個(gè)領(lǐng)域中，為綜合利用蠶蛹、發(fā)展桑業(yè)，為國家GDP的增長(zhǎng)貢獻(xiàn)出一份力量。其中以蠶蛹蛋白粉為原料，采用酶解方法制備的蠶蛹蛋白肽為蠶蛹蛋白的進(jìn)一步利用提供了一個(gè)方向。

現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號(hào)為CN 103520078 B的中國發(fā)明專利，公開了蠶蛹多肽及其制備方法、應(yīng)用，多肽2的制備方法，其步驟包括（1）煎煮，（2）酶解，（3）蛋白質(zhì)分離，（4）半制備RP-HPLC分離純化，（5）凍干。上述酶解采用中性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶酶解。上述蛋白質(zhì)分離采用大孔樹脂、葡聚糖凝膠。上述蠶蛹多肽2是從蠶蛹中提取多肽，安全性好，而且能有效的預(yù)防或治療糖尿病。但是該蠶蛹多肽2的分離提純效果不好。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種分離方法簡(jiǎn)單，可快速高效地分離出抗氧化肽，抗氧化肽得率高、損失低、純度高、活性不被破壞，與最初的酶解物相比，所得抗氧化肽清除自由基和保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷的能力大大提高的分離純化方法。

本發(fā)明針對(duì)上述技術(shù)中提到的問題，采取的技術(shù)方案為：

蠶蛹抗氧化肽的分離純化方法，包括蠶蛹抗氧化肽粗液制備、凝膠柱層析、離子交換樹脂層析、高效液相色譜純化，其具體步驟為：

蠶蛹抗氧化肽粗液制備：將蠶蛹蛋白酶解產(chǎn)物溶于雙蒸水配成濃度為20-30mg/mL的溶液，然后在溫度為1-5℃、轉(zhuǎn)速為10000-13000rpm的離心機(jī)中離心5-10min，上清液即為蠶蛹抗氧化肽粗液，備用，該蠶蛹抗氧化肽粗液中成分較為復(fù)雜，因?yàn)槠浞肿恿亢桶被嵝蛄胁煌哂胁煌奈锢硖匦院蜕锘钚裕瑸榱说玫娇寡趸模仨殞⑵浞蛛x純化；