[發明專利]一種抗CD19的全人源抗體或抗體片段及其方法和應用

有效

• 申請號: 201711395512.2
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號: CN107880128B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 楊光;閔晨雨
• 申請（專利權）人: 常州費洛斯藥業科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K19/00;C12N15/13;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/02
• 代理公司: 上海信好專利代理事務所(普通合伙) 31249
• 代理人: 周乃鑫

1.一種抗CD19的全人源抗體，其特征在于，該抗體包含：重鏈和輕鏈；

所述的重鏈和輕鏈均包括可變區，所述的可變區包括互補決定區CDR1、CDR2和CDR3；

所述的重鏈的互補決定區CDR1、CDR2和CDR3分別用HCDR1、HCDR2和HCDR3表示；

所述的輕鏈的互補決定區CDR1、CDR2和CDR3分別用LCDR1、LCDR2和LCDR3表示；

所述的HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；

所述的HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；

所述的HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；

所述的LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；

所述的LCDR2的氨基酸序列為DVS；

所述的LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。

2.根據權利要求1所述的抗CD19的全人源抗體，其特征在于，所述的重鏈可變區氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；

所述的輕鏈可變區氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.根據權利要求1或2所述的抗CD19的全人源抗體，其特征在于，所述的重鏈用VH表示，所述的輕鏈用VL表示；所述的抗體的氨基酸序列還包括VH-GGGGGS-VL和/或VL-GGGGGS-VH。

4.根據權利要求3所述的抗CD19的全人源抗體，其特征在于，所述的抗體以2×10^-6M 或更低的KD值與人CD19蛋白結合。

5.一種多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸編碼如權利要求1-4中任意一項所述的抗CD19的全人源抗體；

所述的多核苷酸包含：用于編碼所述的重鏈可變區的核苷酸序列SEQ ID NO：8，以及用于編碼所述的輕鏈可變區的核苷酸序列SEQ ID NO：9。

6.一種嵌合抗原受體，其特征在于，該受體含有如權利要求1-4中任意一項所述的抗CD19的全人源抗體；該受體包含依次連接的：信號肽序列、CD19結合結構域、檢測標簽、鉸鏈區和跨膜結構域，以及功能性信號傳導結構域；所述的CD19結合結構域為所述的抗CD19的全人源抗體。

7.根據權利要求6所述的嵌合抗原受體，其特征在于，

所述的鉸鏈區和跨膜結構域包含：鉸鏈區Hinge TM和跨膜結構CD8，該鉸鏈區Hinge TM和跨膜結構CD8的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示；

所述的功能性信號傳導結構域包含：依次連接的CD28、4-1BB和CD3 Zeta；

所述的CD28的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示；

所述的4-1BB的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；

所述的CD3 Zeta的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示；

所述的信號肽序列包含CSF2RA，其氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示；

所述的檢測標簽包含C-Myc，其氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示。

8.一種用于治療或預防腫瘤的T細胞，其特征在于，該T細胞含有如權利要求6或7所述的嵌合抗原受體。

9.一種制備嵌合抗原受體的方法，其特征在于，所述的嵌合抗原受體為權利要求6或7所述的嵌合抗原受體，所述的嵌合抗原受體使用轉座子構建。

10.一種檢測效應細胞被激活的方法，其特征在于，該方法包含：將表達CD19的腫瘤細胞和不表達CD19的腫瘤細胞均作為靶細胞，分別表示為表達CD19組和不表達CD19組，將表達嵌合抗原受體CD19-C8scFv-CAR-T細胞作為效應細胞，將表達CD19組和不表達CD19組分別與效應細胞共培養，檢測細胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF的水平；

若在表達CD19組中CD19-C8scFv-CAR-T細胞分泌的細胞因子的水平高于不表達CD19組，所述的CAR-T效應細胞被激活；

所述的CD19-C8scFv-CAR-T細胞為如權利要求8所述的用于治療或預防腫瘤的T細胞。