[發明專利]一種追風透骨膠囊中馬兜鈴酸A限量檢查方法

在審

• 申請號: 201711393879.0
• 申請日: 2017-12-21
• 公開（公告）號: CN107991419A
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 宋志林;程雪清;張海霞
• 申請（專利權）人: 湖南天地恒一制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及醫藥領域，具體涉及一種中藥復方制劑追風透骨膠囊中馬兜鈴酸A的質量控制方法。

背景技術

馬兜鈴酸是來源于馬兜鈴科植物的中藥材可能含有的毒性成分。馬兜鈴酸具有明顯腎毒性，可造成腎小管功能受損，甚至存在引發腎癌的風險。因此，為確保臨床用藥的安全有效，對于可能含有馬兜鈴酸的中藥必須進行嚴格檢測, 制定限量。

馬兜鈴酸是一類硝基菲類化合物, 包括馬兜鈴酸A、B、C和D等。研究表明, 馬兜鈴酸類化合物的毒性主要由馬兜鈴酸A或其代謝物馬兜鈴內酰胺所致，因此, 在檢測馬兜鈴酸時, 常選擇馬兜鈴酸A（又名馬兜鈴酸Ⅰ）為指標性成分。

目前, 檢測馬兜鈴酸A的方法主要有薄層色譜法、紫外分光光度法、高效液相色譜法等。其中高效液相色譜法(HPLC)靈敏度較高、測定準確, 是目前測定馬兜鈴酸最常用的方法。但HPLC法測定條件多樣，不同條件對測定結果影響較大。

本發明所述追風透骨膠囊為已上市的中藥復方制劑，其處方包含二十四味藥材，功能主治為：通經絡，祛風濕，鎮痛祛寒，用于風寒濕痹，四肢痹痛，神經麻痹，手足麻木。該藥處方中含有馬兜鈴科植物細辛，因此需進行馬兜鈴酸A限量檢查。

現有的馬兜鈴酸A限量檢查方法可見于追風透骨膠囊的國家食品藥品監督管理局標準YBZ04062008的【檢查】項下。該方法為高效液相色譜法，其色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.5%冰醋酸（33：67）為流動相；檢測波長為250nm。

我公司用上述標準方法檢測不含馬兜鈴酸A的追風透骨膠囊細辛陰性樣品時，發現在馬兜鈴酸A對照品岀峰位置有雜峰干擾，導致該方法專屬性不強，可能導致誤判，影響該產品的質量控制。因此我公司對原有方法進行了改進，開發出一種新方法，專屬性優于現有方法，能更好地對追風透骨膠囊進行質量控制。

發明內容

現有的馬兜鈴酸A限量檢查方法（高效液相色譜法）中色譜條件為0.5%冰醋酸：乙腈（67:33）等度洗脫（以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長250nm）。我公司在用該方法檢測不含馬兜鈴酸A的追風透骨膠囊細辛陰性樣品時發現在馬兜鈴酸A對照品岀峰的位置有雜峰干擾，提示該方法專屬性不足。為解決該問題，本發明提供了一種追風透骨膠囊中馬兜鈴酸A限量檢查的新方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：將原方法等度洗脫變更為梯度洗脫，將流動相B由乙腈更換為甲醇，0.5%冰醋酸和甲醇兩種流動相在50分鐘內的初始比例為45：55。

我公司在開發馬兜鈴酸A限量檢查新方法的過程中摸索了多種色譜條件。在確定檢測波長時發現：馬兜鈴酸A對照品的紫外掃描色譜中，在波長為250nm及388nm均有最大吸收，原質量標準中采用的250nm波長處馬兜鈴酸A的吸收強于388nm處，故仍選用250nm作為檢測波長。為消除干擾并達到良好的分離效果，我們開發了梯度洗脫的方法，調整了流動相洗脫條件，將乙腈-0.5%冰醋酸（33:67）調整為乙腈-0.5%冰醋酸（40:60）為初始比例進行梯度洗脫，但分離效果仍無明顯改善，細辛陰性樣品對馬兜鈴酸A的檢測仍有干擾；后將乙腈更換為甲醇，采用初始比例為甲醇-0.5%冰醋酸（40:60），進行梯度洗脫，分離效果仍不夠理想；進一步調整流動相比例為甲醇-冰醋酸（55:45）后，發現在該色譜條件下，馬兜鈴酸A與相鄰雜質峰分離效果良好，細辛陰性樣品對馬兜鈴酸A的檢測無干擾，由此確定了新方法的色譜條件。

本發明的具體方案內容如下所示。

馬兜鈴酸A限量 照高效液相色譜法（中國藥典2015年版四部通則0512）測定。

色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.5%冰醋酸為流動相A，以甲醇為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為250nm。理論塔板數按馬兜鈴酸峰計算應不低于2000。

對照品溶液的制備 精密稱取馬兜鈴酸A對照品5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。