[發明專利]一種蔗糖轉化酶工業化生產方法在審
| 申請號： | 201711389350.1 | 申請日： | 2017-12-21 |
| 公開（公告）號： | CN108070579A | 公開（公告）日： | 2018-05-25 |
| 發明（設計）人： | 許建立;洪振農 | 申請（專利權）人： | 中諾生物科技發展江蘇有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/24 | 分類號： | C12N9/24 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 224300 江蘇省鹽城市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蔗糖轉化酶 中空纖維膜 無菌 濃縮液 酶液 制備 二級種子培養液 一級種子培養液 低溫噴霧干燥 除菌過濾器 高壓均質機 食品酶制劑 除菌過濾 發酵培養 分級過濾 預過濾器 中空纖維 粉劑 發酵罐 活性高 菌懸液 破碎液 濕菌體 微濾膜 種子罐 收率 生產成本 精密 破碎 | ||
1.一種蔗糖轉化酶工業化生產方法，其特征在于：該生產方法的步驟是：
S1、一級種子培養液的制備：將釀酒酵母菌株凍存管接種到一級種子液中進行培養，在26～30℃，200～240rpm搖床條件下培養20～28小時；
S2、二級種子培養液的制備：將一級種子培養液轉入二級種子液中進行培養，在26～30℃，200～240rpm搖床條件下培養20～28小時；
S3、種子罐液培養：將二級種子培養液按照約1％接種量接入種子罐培養基中，在26～30℃，240rpm種子罐條件下培養20～28小時；
S4、發酵罐液培養：將種子罐液按約10％接種量接入發酵罐培養基中，在27-29℃，200～240rpm發酵罐條件下培養約48～52小時；
S5、發酵培養結束后，使用8000轉/分蝶式離心機分離出濕菌體；
S6、濕菌體使用PH5.6的PBS緩沖液清洗后配制成約250g/L菌體濃度的菌懸液；
S7、使用100～150MPa的高壓均質機循環破碎3～5次；
S8、破碎液通過中空纖維膜分級過濾處理，得到純度高的蔗糖轉化酶濃縮液：使用0.2μm中空纖維微濾膜去除大分子物質，蔗糖轉化酶在透析液中；使用30萬道爾頓中空纖維膜進一步去除較大分子物質，蔗糖轉化酶在透析液中；使用3萬道爾頓中空纖維膜去除小分子物質，蔗糖轉化酶在濃縮液中；
S9、蔗糖轉化酶濃縮液經過0.5μm液體預過濾器，0.22μm液體除菌過濾器進行除菌過濾，得到無菌酶液；
S10、無菌酶液經過精密藥用低溫噴霧干燥得到無菌蔗糖轉化酶粉劑。
2.如權利要求1所述蔗糖轉化酶工業化生產方法，其特征在于：噴霧干燥進風溫度120～150℃，出風溫度70℃。
3.如權利要求1所述蔗糖轉化酶工業化生產方法，其特征在于：噴霧干燥所用到的空氣進風系統從外到內設置有粗效過濾器、中效過濾器、高效過濾器、高溫高效過濾器。
4.如權利要求1所述蔗糖轉化酶工業化生產方法，其特征在于：所述一級種子液的組成為：酵母浸粉1.0g，蛋白胨2.0g，葡萄糖2.0g，加水定容至100ml。
5.如權利要求1所述蔗糖轉化酶工業化生產方法，其特征在于：所述二級種子液的組成為：酵母浸粉60.0g，蛋白胨120.0g，葡萄糖120.0g，加水定容至6000ml。
6.如權利要求1所述蔗糖轉化酶工業化生產方法，其特征在于：所述種子罐培養基的組成為：葡萄糖18KG，甘油12KG，磷酸二氫鉀9KG，磷酸二氫銨3KG，硫酸鉀4.5KG，硫酸鎂1.8KG，酵母粉3KG，硫酸鈣0.3KG，消泡劑180毫升，加水滅菌后體積約600L。
7.如權利要求1所述蔗糖轉化酶工業化生產方法，其特征在于：所述發酵罐培養基的組成為:葡萄糖180KG，甘油120KG，磷酸二氫鉀90KG，磷酸二氫銨30KG，硫酸鉀45KG，硫酸鎂18KG，酵母浸粉30KG，硫酸鈣3KG，消泡劑1800毫升，加水滅菌后體積約6000L。
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