[發明專利]特異性識別小鼠Doppel蛋白的單克隆抗體

在審

• 申請號: 201711387964.6
• 申請日: 2017-12-20
• 公開（公告）號: CN108329392A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 丁天兵;王媛;高歡
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 王霞

本發明公開了特異性識別小鼠Doppel蛋白的單克隆抗體，屬于生物醫學技術領域。所述單克隆抗體能夠與天然鼠腦和原核細胞表達的Doppel結合，特異性識別Doppel蛋白的82～90位氨基酸殘基，該82～90位氨基酸殘基的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明克隆了1A9和1D6兩株單克隆抗體的重鏈可變區基因，獲得了重鏈可變區基因序列和氨基酸序列，確認了這些基因序列與蛋白序列的唯一性。鑒于識別的表位序列NYWQFPDGI在小鼠、大鼠和人Doppel蛋白完全相同，顯示這2株單克隆抗體在研究Doppel蛋白功能方面有重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，涉及特異性識別小鼠Doppel蛋白的單克隆抗體重鏈可變區及其基因。

背景技術

小鼠Doppel蛋白發現于1999年，因為其基因位于小鼠正常朊蛋白基因(Prnp)下游16kb處、且結構與功能和小鼠、人朊蛋白(Prion)類似，因此從原始描述Prnpdownstreamprion-like protein而得名Doppel(Doppel在德語中意為“雙的，雙重的”，縮寫為Dpl，中文譯為“疊朊蛋白”)。

小鼠Doppel蛋白基因(Prnd)的序列相對保守，和魚類、四足動物、牛、羊以及人類的基因同源性較大，其功能涉及神經元發育、生殖等重要生理作用，但具體、詳盡的研究報告不多。鑒于目前尚無針對小鼠Doppel蛋白的特異性抗體，因此制備相關抗體對于深入開展小鼠和人Doppel功能研究意義重大。

發明內容

本發明的目的在于提供特異性識別小鼠(Mus musculus)Doppel蛋白的單克隆抗體，并獲得該單克隆抗體重鏈可變區基因序列以及該基因編碼的氨基酸序列。

本發明是通過以下技術方案來實現：

本發明公開了一種特異性識別小鼠Doppel蛋白的單克隆抗體，所述單克隆抗體能夠與天然鼠腦和原核細胞表達的Doppel結合，特異性識別Doppel蛋白的82～90位氨基酸殘基，該82～90位氨基酸殘基的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

優選地，所述單克隆抗體包括兩株，分別為抗小鼠Doppel蛋白單克隆抗體1A9和抗小鼠Doppel蛋白單克隆抗體1D6，抗小鼠Doppel蛋白單克隆抗體1A9和抗小鼠Doppel蛋白單克隆抗體1D6的重鏈均為IgG1亞類，輕鏈均為κ型。

優選地，抗小鼠Doppel蛋白單克隆抗體1A9和抗小鼠Doppel蛋白單克隆抗體1D6的重鏈可變區DNA序列同源性為99％，氨基酸序列相同，相對親和力不同。

進一步優選地，所述抗小鼠Doppel蛋白單克隆抗體1A9的相對親和力為1×10⁵；所述抗小鼠Doppel蛋白單克隆抗體1D6的相對親和力為1×10⁴。

進一步優選地，所述抗小鼠Doppel蛋白單克隆抗體1A9的重鏈可變區基因序列的3個互補決定區(CDR)分別為：

CDR1：GGTTATACCTTCACAGACTATGCA

CDR2：ATAAACACTGCGACTGGTGAGCCA

CDR3：GCTAGTGATGGTCGCTACTGGTACTTCGGTGTC；

對應的氨基酸序列分別為：

CDR1：Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr-Asp-Tyr–Ala

CDR2：Ile-Asn-Thr-Ala-Thr-Gly-Glu-Pro