[發明專利]用于檢測含組蛋白變體的核小體的方法

在審

• 申請號: 201711384538.7
• 申請日: 2012-08-31
• 公開（公告）號: CN108107215A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: J.V.米克萊夫
• 申請（專利權）人: 比利時意志有限責任公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 黃希貴

本發明涉及用于檢測和測定含特定組蛋白變體的單核小體和寡核小體及核小體的存在的方法以及所述測定用于檢測和診斷疾病的用途。本發明亦涉及鑒定組蛋白變體生物標志物以用于檢測和診斷疾病的方法并涉及經所述方法鑒定的生物標志物。

本申請是分案申請，其發明名稱與母案相同，母案的中國申請號是201280053594.1，國際申請號是PCT/GB2012/052131，申請日是2012年8月31日。

發明領域

本發明涉及用于檢測和測定含特定組蛋白變體的單核小體和寡核小體及核小體的存在的方法以及所述測定用于檢測和診斷疾病的用途。本發明亦涉及鑒定組蛋白變體生物標志物以用于檢測和診斷疾病的方法并涉及經所述方法鑒定的生物標志物。

發明背景

人體包含數百種細胞類型。所有這些細胞類型含有相同的基因組，但具有廣泛不同的表型以及在體內的不同功能。這樣的表型多樣性是因基因組在不同細胞類型中的差異表達所致。雖然不完全了解差異基因表達的調控，但是基本機制包括通過與所述基因有關的大量相互連接的表觀遺傳信號的基因調節，其包括將染色質包裝為常染色質或異染色質的調控、核小體定位和核酸酶可接近位點的調控、DNA的甲基化和在其周圍纏繞有DNA的核小體的結構上的變化。

核小體為染色質結構的基本單元以及由八個高度保守的核心組蛋白(包括各一對的組蛋白H2A、H2B、H3和H4)的蛋白質復合物組成。在此復合物周圍纏繞有約146個堿基對的DNA。另一種組蛋白H1或H5充當接頭并涉及染色質致密化。DNA以常常被稱為類似于“繩珠”的結構纏繞在連續的核小體周圍以及這形成開放或常染色質的基本結構。在致密或異染色質中，所述繩經螺旋和超螺旋成閉合而復雜的結構(Herranz和Esteller, 2007)。

核小體的結構可通過組蛋白的轉錄后修飾(PTM)和通過包含變體組蛋白來改變。組蛋白的PTM通常發生在核心組蛋白的尾部，并且常見修飾包括賴氨酸殘基的乙酰化、甲基化或遍在蛋白化以及精氨酸殘基的甲基化和絲氨酸殘基的磷酸化及許多其它修飾。已知組蛋白修飾涉及基因表達的表觀遺傳調節(Herranz和Esteller, 2007)。核小體的結構亦可通過包含備選的組蛋白同種型或變體來改變，所述同種型或變體為不同的基因產物或剪接產物并且具有不同的氨基酸序列。組蛋白變體可分為許多家族，其可再分成獨立的類型。大量組蛋白變體的核苷酸序列為已知的并且可公開得自例如國家人類基因組研究所NHGRI組蛋白數據庫(Mari?o-Ramírez, L., Levine, K.M., Morales, M., Zhang, S.,Moreland, R.T., Baxevanis, A.D.,和Landsman, D. The Histone Database: anintegrated resource for histones and histone fold-containing proteins (組蛋白數據庫：含組蛋白和組蛋白折疊的蛋白質的綜合資源). Database第2011卷. (已提交)和http://genome.nhgri.nih.gov/histones/complete.shtml)、GenBank (NIH遺傳序列)數據庫、EMBL核苷酸序列數據庫和日本DNA數據庫(DDBJ)。

成人中的正常細胞更新涉及每天通過細胞分裂產生約1011個細胞以及主要通過凋亡使類似數量的細胞死亡。在凋亡過程期間，染色質分解成自細胞釋放的單核小體和寡核小體。據報道在正常情況下，在健康受試者中存在的循環核小體的水平低。在患有各種病況的受試者中發現水平升高，所述病況包括許多癌癥、自身免疫性疾病、炎性病況、中風和心肌梗塞(Holdenreider & Stieber, 2009)。