[發(fā)明專利]一種改進(jìn)的Golgi?Cox染色制備腦組織石蠟切片的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711382948.8
• 申請(qǐng)日: 2017-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN107941587A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張海彬;范瑞芳;李楚華;龐啟華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N1/30
• 分類號(hào): G01N1/30
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司44245
• 代理人: 郭煒綿

1.一種制備腦組織石蠟切片的方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)等體積混合A液、B液和C液，避光靜置1-2天，分層后取上清作為工作液；將腦組織浸泡在工作液中，37℃恒溫避光浸染2天；

所述的A液是5％(W/V)重鉻酸鉀水溶液，B液是5％(W/V)氯化汞水溶液，C液是5％(W/V)鉻酸鉀水溶液；

(2)取300g蔗糖、10g聚乙烯吡咯烷酮、300mL乙二醇與500mL 0.1M的PBS緩沖液混合，加水定容至1000mL，為高爾基保護(hù)液；將染色后的腦組織轉(zhuǎn)移至高爾基保護(hù)液中，4℃放置4-7天，每天更換保護(hù)液；

(3)腦組織的石蠟浸蠟、包埋和切片；

(4)石蠟切片的顯色、脫水、透明和封片處理。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(3)所述的石蠟浸蠟、包埋，是將腦組織置于石蠟自動(dòng)包埋儀中，浸蠟4h以上，然后包埋，冷卻后置于-20℃過(guò)夜保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(3)所述的切片包括以下步驟：

使用全自動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，切片厚度調(diào)至150-250μm，利用毛筆刷將切片移至3％明膠溶液包埋的載玻片上，陰涼無(wú)塵處避光放置1-3天。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述的步驟(4)是將石蠟切片用雙蒸水洗滌1-2min，接著用14％氨水浸泡30min；雙蒸水洗滌2-3次，每次30s-2min；5％硫代硫酸鈉處理10min；雙蒸水洗滌1-2次，每次30s-2min；將切片分別置于50％、75％、95％的乙醇溶液中，脫水各4min，再于100％乙醇中浸泡2次，每次4min；將切片轉(zhuǎn)移于等體積的100％乙醇、二甲苯、丙酮或氯仿混合液中，透明15min；最后用中性樹膠封片。