[發(fā)明專利]一種膠乳增強(qiáng)免疫比濁法定量檢測(cè)黃曲霉毒素B1的試劑

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711380795.3
• 申請(qǐng)日: 2017-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN108181247A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭蓬舉;劉昊旻;王威風(fēng);張倩茹;茍麗麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南聯(lián)博生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N1/38
• 代理公司: 鄭州天陽(yáng)專利事務(wù)所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶永杰

本發(fā)明之目的是提供一種膠乳增強(qiáng)免疫比濁法定量檢測(cè)黃曲霉毒素B1的試劑，包括試劑R1、試劑R2、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本提取液；試劑R1由碳酸鈉、碳酸氫鈉、黃曲霉毒素B1?載體蛋白復(fù)合物，調(diào)PH至9.5，加蒸餾水定容至1000ml制成；試劑R2由碳酸鈉，碳酸氫鈉，聚乙二醇，抗黃曲霉毒素B1單抗交聯(lián)膠乳，牛血請(qǐng)白蛋白（BSA），Proclin300，調(diào)PH至9.5，加蒸餾水定容至1000ml制成；本發(fā)明組方科學(xué)合理，易生產(chǎn)制備，使用方便、安全、準(zhǔn)確，可有效用于快速檢測(cè)食品中的黃曲霉毒素B1，確保食品安全，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益顯著。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品安全檢測(cè)，特別是一種膠乳增強(qiáng)免疫比濁法定量檢測(cè)黃曲霉毒素B1的試劑。

背景技術(shù)

黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1AFB1)是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。黃曲霉毒素B1純品為無(wú)色結(jié)晶，相對(duì)分子量為312.27，難溶于水而易溶于油及多種極性有機(jī)溶劑，如氯仿、甲醇、乙醇、丙醇、乙二甲基酰胺，不溶于石油醚、乙醚和己烷。一般在中性溶液中較穩(wěn)定，但在強(qiáng)酸性溶液中稍有分解在，在pH9-10的強(qiáng)堿溶液中分解迅速。黃曲霉毒素對(duì)光、熱較穩(wěn)定，只有加熱到280—300℃才裂解，高壓滅菌2小時(shí)，毒力降低25％—33％，4小時(shí)降低50％。黃曲霉毒素B1在紫外線下發(fā)藍(lán)色熒光，且紫外線對(duì)低濃度黃曲霉毒素B1有一定的破壞性。

黃曲霉毒素主要由黃曲霉、寄生曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的幾率最高。它們存在于土壤、動(dòng)植物、各類堅(jiān)果中，特別是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油產(chǎn)品，是霉菌毒素中毒性最大、對(duì)人類健康危害極為突出的一類霉菌毒素。在天然食物中以黃曲霉毒素B1最為多見，危害性也最強(qiáng)，黃曲霉毒素B1對(duì)人和若干動(dòng)物具有強(qiáng)烈的毒性，其毒性作用主要是對(duì)肝臟的損害。黃曲霉毒素B1的毒性要比嘔吐毒素的毒性強(qiáng)30倍，比玉米赤霉烯酮的毒性強(qiáng)20倍。黃曲霉毒素B1的急性毒性是氰化鉀的10倍，砒霜的68倍，慢性毒性可誘發(fā)癌變，致癌能力為二甲基亞硝胺的75倍，比二甲基偶氨苯高900倍，人的原發(fā)性肝癌與黃曲霉毒素有關(guān)。國(guó)家質(zhì)檢總局規(guī)定黃曲霉毒素B1是大部分食品的必檢項(xiàng)目之一。

目前常用的黃曲霉毒素檢測(cè)方法主要有：薄層層析法(TLC)、高效液相色譜法-熒光檢測(cè)法、微柱篩選法、酶聯(lián)免疫法(ELISA)和膠體金免疫層析方法(CIA)。

薄層層析法(TLC)定量檢測(cè)黃曲霉毒素B1的主要工作原理是將樣品經(jīng)過提取、柱層析、洗脫、濃縮、薄層分離后，在波長(zhǎng)365nm紫外光下產(chǎn)生藍(lán)紫色或黃綠色熒光，并根據(jù)其在薄層上顯示的最低檢出量來(lái)確定其含量。該檢測(cè)方法所用設(shè)備簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉、容易掌握,適用大量樣品的分離、篩選,一般的實(shí)驗(yàn)室均可開展,但該方法屬于定性和半定量檢測(cè)方法，不能精確測(cè)定樣品中AFB1的濃度，且試驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)。

高效液相色譜法-熒光檢測(cè)法定量檢測(cè)黃曲霉毒素B1是近幾年發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)方法,主要是用熒光檢測(cè)器檢測(cè),在適宜的流動(dòng)相條件下,采用反相C18柱,使多種黃曲霉毒素同時(shí)分離。高效液相色譜法靈敏、分辨率高,可作定性、定量分析,同時(shí)可檢測(cè)多個(gè)黃曲霉毒素種類,適于大批量樣品的分析。高效液相色譜法儀器設(shè)備昂貴,技術(shù)水平要求高,每次實(shí)驗(yàn)所使用的化學(xué)藥劑和處理途徑對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響程度差別很大,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精度造成影響；樣品還需進(jìn)行繁瑣的純化處理,不適合快速檢測(cè)。

微柱篩選法定量檢測(cè)黃曲霉毒素B1的主要工作原理：將樣品提取液通過由氧化鋁與硅鎂吸附劑組成的微柱層析管,雜質(zhì)被氧化鋁吸附,黃曲霉毒素被硅鎂吸附劑吸附,在365nm紫外線下呈藍(lán)紫色熒光,其熒光強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)與黃曲霉毒素的含量成正比,由于微柱不能分離黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2,故檢測(cè)結(jié)果為黃曲霉毒素的總量。微柱篩選法測(cè)定黃曲霉毒素,主要是用來(lái)檢驗(yàn)黃曲霉毒素的存在與否以及快速篩選出超標(biāo)樣品。要對(duì)黃曲霉毒素種類進(jìn)行區(qū)分定量檢驗(yàn),則需要對(duì)不同黃曲霉毒素組分進(jìn)行分離,再利用其它方法檢測(cè)。因此,微柱篩選法只能檢測(cè)黃曲霉毒素的總量,僅適用于定性檢驗(yàn)。