[發明專利]預苯酸脫氫酶及其多克隆抗體

在審

• 申請號: 201711377195.1
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN107955807A
• 公開（公告）日: 2018-04-24
• 發明（設計）人: 宮春杰;顧昌祺;陶冶;胡征;楊波
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C07K16/40;C07K16/06
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司42104
• 代理人: 王和平

1.一種預苯酸脫氫酶，其特征在于：所述預苯酸脫氫酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種編碼權利要求1所述的預苯酸脫氫酶的基因，其特征在于：所述預苯酸脫氫酶基因的堿基序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一種預苯酸脫氫酶的多克隆抗體，其特征在于：所述多克隆抗體的抗原為SEQ ID NO.1所示氨基酸序列組成的多肽。

4.一種制備權利要求3所述的預苯酸脫氫酶的多克隆抗體的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的預苯酸脫氫酶為抗原，免疫小鼠制備抗血清；

2)純化抗血清得到預苯酸脫氫酶的多克隆抗體。

5.根據權利要求4所述的預苯酸脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述預苯酸脫氫酶的制備方法為：

1.1)利用PCR技術擴增SEQ ID NO.2所示的堿基序列；

1.2)將SEQ ID NO.2所示的堿基序列克隆入載體質粒中，構建預苯酸脫氫酶的表達載體；

1.3)將表達載體轉化入大腸桿菌感受態菌體中得到重組菌體，依次經擴大培養、誘導表達、收集菌體、破碎菌體和純化蛋白過程得到預苯酸脫氫酶蛋白。

6.根據權利要求4所述的預苯酸脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述純化抗血清的方法為：將預苯酸脫氫酶蛋白與Ni-NTA偶聯制備成抗體純化層析柱，再將待純化的抗血清與PBS按照1:1比例混合后經過抗體純化層析柱，待抗血清中的抗體與預苯酸脫氫酶蛋白結合完全后用甘氨酸洗脫緩沖液洗脫，獲得純化的預苯酸脫氫酶的多克隆抗體。

7.根據權利要求5所述的預苯酸脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟1.1)中，PCR技術擴增所用的引物為：正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4所示。

8.根據權利要求5所述的預苯酸脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟1.2)中載體質粒為pET21a(+)。

9.根據權利要求5所述的預苯酸脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟1.3)中，大腸桿菌感受態菌體為大腸桿菌BL21感受態菌體。

10.根據權利要求5所述的預苯酸脫氫酶的多克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟1.3)中，所述純化蛋白過程中利用Ni-NTA親和層析色譜柱進行蛋白純化。