[發明專利]用于大腸桿菌氟喹諾酮類抗生素耐藥性的檢測試劑盒、檢測方法及應用

有效

• 申請號: 201711376770.6
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN108034736B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 張鐵;王春光;張石磊;翟向和;史萬玉
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/10;C12R1/19
• 代理公司: 石家莊國為知識產權事務所 13120
• 代理人: 柳萌

1.一種用于大腸桿菌氟喹諾酮類抗生素耐藥性的檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測試劑盒用于高通量熒光定量PCR檢測大腸桿菌氟喹諾酮類抗生素耐藥性，包括以16S rDNA為內參基因的emrB、emrA、emrE、emrK、emrR、emrY、mdtK、mdtA、mdtE、mdtG、mdtH、mdtD、mdtM、mdtN、mdtO、mdtP基因的引物，所述引物的序列如下所示：

16S的上游引物：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；

16S的下游引物：GGTTACCTTGTTACGACTT；

emrB的上游引物：CTTTTCTCTAACCGTACATTATCTACGATAAA；

emrB的下游引物：AGAACGTAGCGACTGATAAAATGCT；

emrA的上游引物：CTGCTCCTCCTTCTCACCTTG；

emrA的下游引物：TTATCGGCCCAGACTTTCGT；

emrE的上游引物：ATCTTGGTGGTGCAATACTTG；

emrE的下游引物：GGACAATACCGACTCCTGAC；

emrK的上游引物：ATGCCACTATCGCACTCAA；

emrK的下游引物：TGGTATGCTCCAGCGTTTC；

emrR的上游引物：TTTACCGCCGCAGCATAAC；

emrR的下游引物：ACACCGCCCTGTTCCATCT；

emrY的上游引物：TTAGTGCTCGGTGTTGGTG；

emrY的下游引物：GAGTAACTGCGGCATAAGG；

mdtK的上游引物：ACACCAGATTGCCCTGAACTT；

mdtK的下游引物：TTGCCATACAGACACCCACC；

mdtA的上游引物：CCTAACGGGCGTGACTTCA；

mdtA的下游引物：TTCACCTGTTTCAAGGGTCAAA；

mdtE的上游引物：CGTCGGCGCACTCGTT；

mdtE的下游引物：TCCAGACGTTGTACGGTAACCA；

mdtG的上游引物：TGGCACAAAATATCTGGCAGTT；

mdtG的下游引物：TTGTGTGGCGATAAGAGCATTAG；

mdtH的上游引物：CTGCCGTTAAATGGATGTATGC；

mdtH的下游引物：ACTCCAGCGGGCGATAGG；

mdtD的上游引物：GTCTGAAACTGTTCCGCACTC；

mdtD的下游引物：ACCAAAGCGATTCACTACCTG；

mdtM的上游引物：GAGGCGTTCGGACAGACAA；

mdtM的下游引物：CCAACAGTAAGCCAACAAATGA；

mdtN的上游引物：CTCTGTTAGTGGTTGCGTTGG；

mdtN的下游引物：ACTGCCTGGTTGTCGGTGA；

mdtO的上游引物：CTGGGATGCCACCTGGAACT；

mdtO的下游引物：TGAGGAGAACGGCTGAGTGC；

mdtP的上游引物：CGAAACTGCGGGAAGAAA；

mdtP的下游引物：GCAAACAAACCTACTGTGGC。

2.一種非診斷目的的用于大腸桿菌氟喹諾酮類抗生素耐藥性的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法為高通量熒光定量PCR方法，所述檢測方法至少包括以下步驟：

步驟1、從待測樣品中提取DNA樣品；

步驟2、采取權利要求1所述用于大腸桿菌氟喹諾酮類抗生素耐藥性的檢測試劑盒對步驟1所提取的所述DNA樣品使用高通量熒光定量PCR儀進行擴增反應；

步驟3、對所得結果進行數據分析。

3.如權利要求2所述的非診斷目的的用于大腸桿菌氟喹諾酮類抗生素耐藥性的檢測方法，其特征在于：所述高通量熒光定量PCR反應體系組成如下：Roche FastStart UniversalSYBR Green Master：5μL，ddH₂O：3μL，上游引物：0.75μL，下游引物：0.75μL，DNA樣品：0.5μL。