[發明專利]一種檢測抗體類藥物與人體和動物正常組織交叉反應的方法

在審

• 申請號: 201711367415.2
• 申請日: 2017-12-18
• 公開（公告）號: CN108106910A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 李寧;楊鳳英;周雷;車彤彤;李殿香;胡楊
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N1/42;G01N33/50
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 于曉曉

本發明公開了一種檢測抗體類藥物與人體和動物正常組織交叉反應的方法，包括以下步驟：(1)人體和動物組織標本的固定和包埋；(2)人體和動物組織芯片的制備；(3)人體和動物組織標本的切片與排布；(4)抗體類藥物的標記；(5)采用免疫組織化學方法檢測抗體類藥物與人體和動物正常組織交叉反應。該方法首先利用組織芯片進行初篩，然后在人體和不同動物種屬組織中進行高通量的免疫組化試驗，并提高對結果判讀的準確性，有效地提高了組織交叉反應試驗的效率，加快實驗流程，適合產業化。

技術領域

本發明涉及一種檢測抗體類藥物與人體和動物正常組織交叉反應的方法，特別是涉及一種高通量地、更準確地進行結果判讀的用于冰凍組織切片和石蠟組織切片的方法，所涉及的動物組織來源于大鼠、小鼠、犬、狨猴、食蟹猴或恒河猴。

背景技術

作為一種特殊的生物技術藥物，單克隆抗體(以下簡稱單抗)具有其特定的免疫化學性質，即對抗原結合的特異性，表現為單抗可作用于表達其抗原表位的靶組織。但如果正常組織中存在相同或相似的抗原表位，單抗則可能會與靶組織以外的其他組織發生結合，從而可能導致不良反應的發生。因此，單抗的免疫化學性質評價還應包括對這種可能的“脫靶”結合的考察。組織交叉反應檢測是區分“在靶”結合的靶器官和“脫靶”結合的非靶器官的重要手段，同時通過對單抗在人體和動物組織中組織交叉反應類型的比較，可以為用于毒性評價的動物種屬選擇提供參考。此外，對于含有人免疫球蛋白IgG的Fc片段的融合蛋白，由于其具有與分布于正常組織上的Fc受體結合的可能性，因此在某些情況下，進行這一類藥物的組織交叉反應檢測也是有意義的。

盡管組織交叉反應試驗是基于常規的免疫組織化學技術而實施的，但是系統的將30余種組織(每種組織來自3個個體)在同一個系統中進行高通量地檢測、比對和評價，需要進行精心的設計和對現有方法的改進，以便高通量地進行試驗的實施和對結果進行準確地判讀。基于此，需要開發一種高通量、更準確地檢測抗體類藥物與人體和動物正常組織交叉反應的方法。

發明內容

本發明就是針對上述存在的缺陷而提供一種檢測抗體類藥物與人體和動物正常組織交叉反應的方法。該方法首先利用組織芯片進行初篩，然后在人體和不同動物種屬組織中進行高通量的免疫組化試驗，并提高對結果判讀的準確性，有效地提高了組織交叉反應試驗的效率，加快實驗流程，適合產業化。

本發明的一種檢測抗體類藥物與人體和動物正常組織交叉反應的方法技術方案為，包括以下步驟：

(1)人體和動物組織標本的固定和包埋；

(2)人體和動物組織芯片的制備；

(3)人體和動物組織標本的切片與排布；

(4)抗體類藥物的標記；

(5)采用免疫組織化學方法檢測抗體類藥物與人體和動物正常組織交叉反應。

所述步驟(1)中，采集的步驟為：動物麻醉后摘取新鮮組織，剔除結締組織和多余脂肪，用生理鹽水沖掉殘留的血液并用吸水紙吸凈水分；人體組織采用活檢組織或手術標本；

動物組織來源于以下種屬：大鼠、小鼠、犬、狨猴、食蟹猴和恒河猴，每個種屬單獨取材并建立組織庫。

所述新鮮組織包括以下33種：