[發(fā)明專利]一種SPE法提取循環(huán)腫瘤DNA的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711364691.3
• 申請(qǐng)日: 2017-12-18
• 公開（公告）號(hào): CN109929830B
• 公開（公告）日: 2023-01-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁鑫淼;李秀玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 沈陽晨創(chuàng)科技專利代理有限責(zé)任公司 21001
• 代理人: 鄭虹

1.一種SPE法提取循環(huán)腫瘤DNA的方法，其特征在于采用分散固相萃取模式，具體步驟如下：

1)將循環(huán)腫瘤DNA富集材料裝入移液槍槍頭或者凝膠上樣吸頭中，形成微固相萃取柱，采用洗脫液和上樣液活化及平衡微固相萃取柱，將生物樣品溶解于上樣液中，并上到微固相萃取柱上，循環(huán)腫瘤DNA富集材料與生物樣品的質(zhì)量比為100～1000:1；

2)采用5-200倍柱體積的淋洗液沖洗萃取柱，淋洗液pH 0-7；

3)采用5-100倍柱體積的洗脫液洗脫得循環(huán)腫瘤DNA，洗脫液pH 10-12；

上述整個(gè)過程在10-60℃進(jìn)行；

所述循環(huán)腫瘤DNA富集材料為金屬內(nèi)核/碳?xì)咏Y(jié)構(gòu)的納米顆粒材料；所述金屬內(nèi)核/碳?xì)咏Y(jié)構(gòu)的納米顆粒材料，其內(nèi)核為金屬納米顆粒，其外殼的結(jié)構(gòu)式為如下所示：

所述金屬為Ag,Ti,Fe,Ga,Ni,Au,Pd或Pt。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種SPE法提取循環(huán)腫瘤DNA的方法，其特征在于所述生物樣品為血液、滑膜液、腦脊液或尿液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種SPE法提取循環(huán)腫瘤DNA的方法，其特征在于所述上樣液為有機(jī)溶劑、有機(jī)酸和水的混合液，有機(jī)溶劑為乙腈、甲醇或乙醇；有機(jī)酸為甲酸、乙酸或三氟乙酸，所述上樣液中有機(jī)溶劑體積為10-50％，pH 0-7。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種SPE法提取循環(huán)腫瘤DNA的方法，其特征在于所述洗脫液為有機(jī)溶劑、有機(jī)酸和水的混合液，有機(jī)溶劑為乙腈、甲醇或乙醇；有機(jī)酸為甲酸、乙酸或三氟乙酸，所述洗脫液中有機(jī)溶劑體積為10-50％，pH 10-12。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種SPE法提取循環(huán)腫瘤DNA的方法，其特征在于：所述淋洗液為有機(jī)溶劑、有機(jī)酸和水的混合液，有機(jī)溶劑為乙腈、甲醇或乙醇；有機(jī)酸為甲酸、乙酸或三氟乙酸，所述淋洗液中有機(jī)溶劑的體積為0-50％，pH 0-7。