[發(fā)明專(zhuān)利]用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的試劑盒及臨床應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711350112.X
• 申請(qǐng)日: 2017-12-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109929930A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬永;丁燕芬;丁娜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇眾紅生物工程創(chuàng)藥研究院有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的試劑盒，分別包括：

用于檢測(cè)G1624A突變的突變上游引物，其堿基序列如SEQ ID NO：11所示；和/或

用于檢測(cè)G1633A突變的突變上游引物，其堿基序列如SEQ ID NO：16所示；和/或

用于檢測(cè)G1635T突變的突變上游引物，其堿基序列如SEQ ID NO：18所示；和/或

用于檢測(cè)A3140G突變的突變上游引物，其堿基序列如SEQ ID NO：24所示；和/或

用于檢測(cè)A3140T突變的突變上游引物，其堿基序列如SEQ ID NO：25所示；和/或

用于人G1624A/G1633A/G1635T基因突變檢測(cè)的突變下游引物，堿基序列如SEQ ID NO：29所示。

用于檢測(cè)A3140G/A3140T突變的突變下游引物，其堿基序列如SEQ ID NO：31所示；和/或

用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的內(nèi)控/外控上游引物，堿基序列如SEQ ID NO:33所示。

用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的內(nèi)控/外控下游引物，堿基序列如SEQ ID NO：34所示。

用于檢測(cè)G1624A/G1633A/G1635T突變的突變探針，其堿基序列如SEQ ID NO：30所示；和/或

用于檢測(cè)A3140G/A3140T突變的突變探針，其堿基序列如SEQ ID NO：32所示；和/或

用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的內(nèi)控探針，堿基序列如SEQ ID NO：35所示。

用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的外控探針，堿基序列如SEQ ID NO：35所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的試劑盒，其特征在于：所述用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的內(nèi)控探針，5’端修飾VIC或HEX熒光基團(tuán)；3’端修飾BHQ-1熒光基團(tuán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的試劑盒，其特征在于：所述用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的突變探針和外控探針，5’端修飾FAM熒光基團(tuán)，3’淬滅基團(tuán)為BHQ1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的試劑盒，其特征在于：試劑盒反應(yīng)體系中含有1uM上下游引物各2～4ul、1uM突變探針0.5-1ul、1uM內(nèi)控或外控探針1.5～2ul。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的試劑盒，其特征在于：試劑盒反應(yīng)體系中還包括上述用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的試劑盒，反應(yīng)體系為UNG酶1U、Taq酶0.25～0.5U、10*緩沖液4ul、25mM MgCl₂ 1～3ul、10uM dU plus dNTP 0.6～1ul、DNA模板10ng、1uM上下游引物各2～4ul、1uM突變探針0.5～1ul、1uM內(nèi)控探針1.5～2ul、ddH2O補(bǔ)足40ul。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于人PIK3CA基因突變檢測(cè)的試劑盒，其特征在于：所述10*緩沖液的成分及含量：100mM Tris-HCl(pH 8.8)、500mM KCl、15mM MgCl₂、0.8％(V/V)NP-40。