[發明專利]一種利用微生物發酵法提高棉粕飼用營養價值的工藝

有效

• 申請號: 201711348058.5
• 申請日: 2017-12-16
• 公開（公告）號: CN108208335B
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 董書閣;張順濤;陳希凱;張志軍
• 申請（專利權）人: 桂林精成生物科技有限公司
• 主分類號: A23K10/30
• 分類號: A23K10/30;A23K10/37;A23K10/33;A23K10/12;A23K20/105;A23K20/26;A23K20/189
• 代理公司: 合肥律眾知識產權代理有限公司 34147
• 代理人: 趙娟

1.一種利用微生物發酵法提高棉粕飼用營養價值的工藝，其特征 在于具體包括混菌好氧發酵和混菌厭氧發酵二步工序，其中好氧發酵菌群包括黑曲霉、酵母菌、枯草芽孢桿菌、冷解糖芽孢桿菌；厭氧發酵菌群包括酪酸梭狀芽孢桿菌和乳酸菌；其中所述好氧發酵菌群中黑曲霉、酵母菌、枯草芽孢桿菌、冷解糖芽孢桿菌的用量比為1.2:0.8:1:4；所述混菌好氧發酵和混菌厭氧發酵二步工序具體包括：

（1）預處理：選取無霉變的棉粕，粉碎過40目篩，調整棉粕含水量40～60%；

（2）配制固體培養基：向棉粕中加入3～5wt%糖蜜、2～3wt %玉米漿、1.5～2wt%尿素、1～1.5wt%硫酸銨、0.1～0.2wt%磷酸二氫鉀，并加入0.5～1wt%非淀粉多糖酶，調整初始pH為6.5～7.0；

（3）好氧發酵：將黑曲霉、酵母菌、枯草芽孢桿菌、冷解糖芽孢桿菌接種至培養基，總接種量為固體培養基的2～3%，拌勻后控溫35～40℃培養，通風培養24～30h；

（4）厭氧發酵：好氧發酵后停止通風，2h后接種酪酸梭狀芽孢桿菌和乳酸菌，接種量分別為固體培養基的1.5～2%、1～1.5%，厭氧發酵12～16h;

（5）干燥：發酵結束后低溫通風干燥；

（6）粉碎：將干燥后的發酵棉粕粉碎即得棉粕蛋白飼料；

上述步驟（2）中固體培養基無需滅菌。

2.根據權利要求1所述的一種利用微生物發酵法提高棉粕飼用營養價值的工藝，其特征在于所述酵母菌可以是產朊假絲酵母、啤酒酵母、釀酒酵母、脆壁克魯維酵母中一種或幾種的混合菌；

3.根據權利要求1-2所述的一種利用微生物發酵法提高棉粕飼用營養價值的工藝，其特征在于所述酵母菌的最佳菌種為產朊假絲酵母與脆壁克魯維酵母的混合菌，其用量比為7:3。

4.根據權利要求1所述的一種利用微生物發酵法提高棉粕飼用營養價值的工藝，其特征在于所述黑曲霉的種子液制備方法為：取新鮮麩皮，用60目篩子篩去細粉，按麩皮：水＝1：1.0～1.3比例加入水，拌勻至無干粉又無結團現象。拌勻后，分裝入2000mL三角瓶中，每只2000mL三角瓶裝濕麩皮約100g，在0.1MPa表壓下滅菌40～60min，冷卻至35℃，每一個三角瓶中接入1-2環已活化好的斜面米曲霉cv-8、黑曲霉sp-1孢子，培養基品溫控制在(35±1)℃．每隔12-24h搖瓶一次，孢子長出后停止制備孢子懸浮液；然后按照上述方法接種至種子罐進行擴大培養，制備成二級種子液。

5.根據權利要求1所述的一種利用微生物發酵法提高棉粕飼用營養價值的工藝，其特征在于所述酵母菌種子液制備方法為：在無菌操作條件下，從酵母菌YDP斜面上用接種環挑取兩環菌種，接種到500mL裝300mLPDA液體培養基的三角瓶內，28℃～32℃，140r/min振蕩培養24h后，6000r/min條件下離心15min收集菌體，并用質量濃度0.85%的無菌生理鹽水洗滌酵母菌體兩次，最后用無菌的生理鹽水洗下酵母菌，制成酵母菌菌懸液，用血球計數板計數，控制菌懸液濃度為1×10⁸CFU/mL，冰箱保存待用。

6.根據權利要求1所述的一種利用微生物發酵法提高棉粕飼用營養價值的工藝，其特征在于所述枯草芽孢桿菌、冷解糖芽孢桿菌種子液制備方法為：在無菌條件下，采用LB培養基在28～32℃條件下培養24h，制得液體芽孢桿菌菌懸液，用血球計數板計數，控制菌懸液濃度為1×10⁸CFU/mL，冰箱保存待用。

7.根據權利要求1所述的一種利用微生物發酵法提高棉粕飼用營養價值的工藝，其特征在于所述酪酸梭狀芽孢桿菌和乳酸菌的種子液制備方法為：將斜面或甘油管保藏菌種截至相應的種子培養基，其中酪酸梭狀芽孢桿菌接種至LB培養基，乳酸菌菌種接種至MRS培養基中，37℃靜置培養20～30h得到一級種子液；然后將一級種子液接種到10L的玻璃瓶種子發酵罐中，37℃發酵20～30h得到二級種子液。

8.根據權利要求1所述的一種利用微生物發酵法提高棉粕飼用營養價值的工藝，其特征在于所述乳酸菌可以是嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、保加利亞乳桿菌中的一種或幾種的混合。