[發明專利]一種快速檢測肉雞盲腸蛋白質水解細菌的方法

有效

• 申請號: 201711341595.7
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN108204962B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 夏云;孔云虹;瞿越云;趙亞南;念馨;張旭祥;段芳
• 申請（專利權）人: 昆明學院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/28;G01N1/30;G01N1/38
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 陳左;亢能

本發明涉及一種快速檢測肉雞盲腸蛋白質水解細菌的方法，包括如下步驟：步驟（1）、樣品采集；步驟（2）、稀釋樣品；步驟（3）、洗脫細胞；步驟（4）、收集濾液；步驟（5）、收集沉淀物；步驟（6）、肉雞盲腸蛋白質水解細菌的標定；步驟（7）、肉雞盲腸蛋白質水解細菌的回位鑒定；步驟（8）、盲腸蛋白質水解細菌的豐度的確定及統計分析。本發明較大地降低了勞動強度，成本較低，操作過程簡便，實驗結果準確無誤，能迅速提供給飼養人員相關的信息和數據，縮短篩選優質飼料配方的過程，能快速提供給飼養人員肉雞盲腸蛋白質降解細菌的信息和數據，為確定特殊的飼料配方，在特殊的飼養條件下對肉雞的生產性能和健康的影響程度。

技術領域

本發明涉及一種快速檢測蛋白質水解細菌的方法，一種快速檢測肉雞盲腸蛋白質水解細菌的方法。

背景技術

肉雞的腸道健康是肉雞生長所必須的條件之一。腸道菌群的平衡對維持健康的腸道取著重要的功能。腸道內穩態紊亂會影響腸道功能和健康，導致生理失調，危害肉雞健康并導致生長性能下降。對無菌肉雞的研究顯示，腸道微生物能夠促進腸道成熟，提高機體免疫力，抑制病原菌，促進肉雞生長，降解不易消化的食物，能夠產生揮發性脂肪酸、維生素，因此腸道微生物在腸道發育及功能發揮方面具有重要的作用。

近年來，隨著肉雞飼養周期的逐年下降，目前肉雞在5周內食用3.0公斤飼料后，雞體重可達2.0公斤。快速增長的肉雞生長速度與過去幾十年來人們選擇高轉化率的飼糧蛋白質而導致的高采食量有關。在實際肉雞的飼養過程中，飼糧配方中的高轉化率蛋白質常常含有一定量未能消化的蛋白質，這部分蛋白質一旦進入肉雞的盲腸，盲腸微生物菌群就利用它們作為降解的底物并產生能源來促進微生物菌群自身的增殖。近年來，由于需要向快速生長的肉雞提供含有高轉化率蛋白質的飼糧，因而導致了飼糧中未經消化的蛋白質流入盲腸進而發酵的數量增加，這部分蛋白質發酵的產物對肉雞腸道健康的影響越來越受到關注。

在肉雞的小腸和盲腸中，氨基酸和蛋白質的代謝機制是不同的。小腸中的微生物菌群與宿主競爭飼糧中的氨基酸，并吸收氨基酸合成自身新的細胞；盲腸微生物菌群則僅利用逃脫宿主消化的蛋白質和氨基酸。前期研究證明最優質的飼糧配方也不能保證所有的飼糧蛋白質都在小腸內被宿主吸收，總是有一部分蛋白質會逃脫宿主消化而流入盲腸，通過盲腸微生物進行分解發酵。一般來說，流入盲腸的蛋白質包括飼糧中的抗性蛋白質(不能被宿主蛋白酶或小腸細菌消化的蛋白質，其數量取決于飼糧蛋白質的原料或飼料加工質量)、微生物蛋白質(小腸乳酸桿菌和其他細菌競爭氨基酸，不可避免地吸收一些膳食氨基酸并利用它們進行合成代謝)和宿主合成和分泌的蛋白質(內源蛋白)。

現代肉雞的飼養過程中，通過利用高轉化率的飼糧蛋白質來提高肉雞生長速度的同時，不僅要減少小腸微生物和宿主競爭營養物質，同時也要監控盲腸中的蛋白質的數量，以便及時調整飼糧的組成結構，降低因盲腸蛋白質代謝產生的有毒物質而導致宿主健康問題的風險。在飼糧蛋白質轉化率較高的情況下，蛋白質容易消化，小腸中的微生物蛋白質保持最低量，用于防御的內源蛋白質的分泌物不應過高。一旦飼糧蛋白質脫離了宿主消化，并且不能用于宿主，未經消化的飼糧蛋白質進入盲腸，增加了蛋白質在盲腸的分解發酵水平，導致了盲腸蛋白質發酵產生的有毒代謝產物對肉雞腸道后端的功能、肉雞健康、肉雞生產性能的負面影響。

由于飼糧是腸道微生物最重要的生長基質，飼糧的組成和消化率對腸道微生物群體有著重要影響。現代肉雞的飼養不僅要求符合營養需要的飼糧配方，還要考慮利用飼糧配方的組成來調控微生物菌群的代謝活性對宿主健康和生產性能的影響。當飼糧中的淀粉和可發酵的碳水化合物有限或蛋白質豐富時，未經消化的飼糧蛋白質進入肉雞盲腸通過盲腸中的致腐細菌進行發酵反應，盲腸蛋白質發酵產物除了包括對肉雞生長有益的氨基酸、揮發性脂肪酸(VFA)和支鏈脂肪酸(BCFA)等產品之外，同時還產生許多有害和有毒的化合物，包括氨、生物胺、吲哚、酚、甲酚等。氨很容易被肉雞從腸道吸收到血液中，對腸內細胞具有毒性作用；生物胺雖然參與到腸道細胞中的各種生理過程，但高濃度的生物胺會降低肉雞的生長速度并增加肉雞的死亡率，肉雞盲腸蛋白質代謝的有毒產物最終降低了飼料轉化率，對肉雞的生長和性能產生不利影響。