[發明專利]一種適體和魯米諾-金納米粒子功能化的RNA膜及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711340992.2
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN108148810B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 郭英姝;尚鑫鑫;劉斐;張書圣
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;G01N21/76;G01N27/327
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明涉及一種適體和魯米諾?金納米粒子功能化的RNA膜及其制備方法和應用，屬于生物材料制備技術領域。本發明提供了一種適體和魯米諾?金納米粒子功能化的RNA膜，本發明提供的適體和魯米諾?金納米粒子功能化的RNA膜含有大量的氨基，能夠保證所形成的的RNA及RNA膜穩定；魯米諾?金納米粒子對RNA膜的表面修飾能夠使其具有電致化學發光的性質；Ramos適體對RNA膜的表面修飾能夠使其對Ramos細胞有特異性識別作用。本發明提供的功能化的RNA膜能夠實現循環腫瘤細胞的捕獲和釋放，且APS能夠使電致化學發光增強，實現生物傳感的高效檢測。

技術領域

本發明涉及生物材料制備技術領域，具體涉及一種適體和魯米諾-金納米粒子功能化的RNA膜及其制備方法和應用。

背景技術

循環腫瘤細胞(CTCs)是從原發性腫瘤流入脈管系統或淋巴系統并在體內循環的細胞。它是腫瘤生長相關基因組和蛋白質組的載有信息的貨運載體，其進入循環系統并在重要的遠端器官中形成轉移，是造成大多數癌癥相關死亡的重要原因。因此，從外周血檢測CTCs可成為常規癌癥診斷的可靠替代，有望成為一種新的癌癥“生物標記物”，用于觀測疾病進展和指導治療實施。然而，由于缺少可靠的用于鑒定CTCs的工具箱，因此闡明體液中的CTCs功能仍遠遠落后于基因組和蛋白質組。

物理法基于腫瘤細胞與正常細胞物理性質，如大小、變形性、密度、介電性等的差異，利用外力場比如磁場，流體場，電場等的作用進行分離捕獲。生物化學法通常依賴于細胞膜表面的抗原與偶聯在分離介質上的抗體相結合，達到分離捕獲的目等。這些方法已被用于癌細胞的識別，捕獲，分離和成像，這被認為是用于CTCs計數的有希望的工具。

由于生物納米復合物和典型的CTCs表面標志物之間的局部地形交互的設計，雖然上述這些技術可以識別并結合特有的CTCs，但是它們被限制為低能力和低特異性結合捕獲CTCs。CTCs可能具有一個以上的表面標記物，單個表面生物標志物的豐度也可隨著細胞周期階段的變化而波動，導致生物標志物與其相應識別分子之間的結合親和力可發生變化。現有技術并沒有關于能夠高效檢測CTCs的材料或方法的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種適體和魯米諾-金納米粒子功能化的RNA膜及其制備方法和應用。本發明提供的適體和魯米諾-金納米粒子功能化的RNA膜能夠實現循環腫瘤細胞的捕獲和釋放，且能夠使電致化學發光增強，實現生物傳感的高效檢測。

本發明提供了一種適體和魯米諾-金納米粒子功能化的RNA膜，包括RNA膜和功能修飾單元，所述功能修飾單元包括Ramos適體和魯米諾-金納米粒子，所述RNA膜和Ramos適體和魯米諾-金納米粒子分別通過羧基-氨基和Au-N鍵作用力結合；

所述適體和魯米諾-金納米粒子功能化的RNA膜的制備方法包括以下步驟：

1)將HAuCl₄溶液在加熱、攪拌的條件下與魯米諾溶液混合，得到魯米諾-金納米粒子溶液；

2)將5μM磷酸化的DNA 1和5μM的引物1于水中混合，95℃保持2min，冷卻至25℃，加入T4連接酶和連接反應緩沖液，25℃連接反應12h，得到環化的DNA1；所述DNA1的序列如SEQID NO.1所示；

所述引物1的序列如SEQ ID NO.4所示，或所述引物1為在SEQ ID NO.4所示的序列的5’端標記有巰基或生物素的物質；

3)將5μM磷酸化的DNA2和5μM的引物1于水中混合，95℃保持2min，冷卻至25℃，加入T4連接酶和連接反應緩沖液，25℃連接反應12h，得到環化的DNA2；所述DNA2的序列如SEQID NO.2所示；