[發明專利]一種提高文庫構建試劑穩定性的方法

在審

• 申請號: 201711313523.1
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN108424904A
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 金晶;王西龍
• 申請（專利權）人: 南京迪格諾斯生物技術有限公司
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96
• 代理公司: 南京常青藤知識產權代理有限公司 32286
• 代理人: 金迪

本發明提供一種提高文庫構建試劑穩定性的方法，具體涉及基因測序技術領域，將文庫構建所需要的工具酶進行如下步驟處理，S1：將工具酶進行納米膠囊封裝保存，封裝的方法包括原位聚合封裝方法和通過電荷吸附的自交聯的封裝中的一種；S2：使用時，加入降解交聯劑的化學試劑，使工具酶具有活性。本發明使文庫構建試劑盒能夠在常溫下保存，減少物流倉儲的成本，同時保存酶活性的穩定，能夠在常溫下保存12個月。

技術領域

本發明屬于基因測序技術領域，具體涉及一種提高文庫構建試劑穩定性的方法。

背景技術

環境對文庫構建試劑穩定性影響最大的是工具酶，工具酶的本質是蛋白質，它們對于外界的環境如溫度、pH等同樣十分敏感，外界因素極易影響氨基酸殘基和蛋白質二級結構從而導致蛋白分子結構的改變以及活性的丟失或喪失。因此，文庫構建試劑的工具酶需要低溫保存，這無疑增大了物流倉儲的成本，同時使用過程中反復凍融降低酶的活性。

因此急需一種提高文庫構建試劑穩定性的方法，使其能夠在常溫下保存，減少物流倉儲的成本，同時保存酶活性的穩定。

發明內容

本發明的目的是提供一種提高文庫構建試劑穩定性的方法，使其能夠在常溫下保存，減少物流倉儲的成本，同時保存酶活性的穩定。

本發明提供了如下的技術方案：

一種提高文庫構建試劑穩定性的方法，將文庫構建所需要的工具酶進行如下處理：

S1：將工具酶進行納米膠囊封裝保存，封裝的方法包括原位聚合封裝方法和通過電荷吸附的自交聯的封裝中的一種；

S2：使用時，加入降解交聯劑的化學試劑，破壞納米膠囊使工具酶具有活性。

優選的，將步驟S1中所述的工具酶進行封裝后，得到液體產品與工具酶反應所需要的Buffer液按一定比例混合進行凍干處理得到凍干粉，保存待用。

優選的，步驟S1中所述的原位聚合封裝方法如下：

1)：加一定量的N-丙烯酰氧基琥珀酰亞胺到工具酶中，使工具酶被N-丙烯酰氧基琥珀酰亞胺丙烯酰化；

2)：以過硫酸銨和N,N,N`,N`-四甲基乙二胺為引發劑，加入一定量的引發劑到步驟1)中所得到的丙烯酰化的工具酶的表面引發自由基聚合；

3)：加入一定量的N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺和交聯劑的混合物到步驟2)中所得到的反應物中，反應時間大于60分鐘，得到納米膠囊包裹的工具酶，其中交聯劑為二甲基丙烯酸甘油酯和雙(2-甲基丙烯)乙氧基二硫中的一種；

4)：用凝膠過濾柱分離純化得到包裹有納米膠囊的成品工具酶。

優選的，使用交聯劑是二甲基丙烯酸甘油酯時，則使交聯劑降解的化學試劑是低pH的緩沖液；使用交聯劑是雙(2-甲基丙烯)乙氧基二硫時，則使交聯劑降解的化學試劑是DTT(二硫蘇糖醇)。

優選的，N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺和交聯劑的混合物的混合摩爾比是3:7:1。

優選的，步驟S1中所述的通過電荷吸附的自交聯的封裝方法如下：

第一步：通過加入pH為8.0-8.5的溶液使工具酶帶負電荷；

第二步：富含正電荷基團的高分子聚合物和琥珀酰亞胺酯修飾聚乙二醇以一定比例混合一段時間后，清洗分離，可得部分正電荷基團被聚乙二醇化的高分子聚合物；

第三步：再在第二步所得的聚合物中加入一定量的特勞特試劑，反應一段時間后，得含有巰基、聚乙二醇和正電荷基團修飾的高分子聚合物；