[發(fā)明專(zhuān)利]顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因及其重組植物表達(dá)載體和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711310317.5
• 申請(qǐng)日: 2017-12-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107937414A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖志華;陳敏;楊春賢;邱飛;強(qiáng)瑋
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 西南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/29
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/29;C07K14/415;C12N15/82;A01H5/06;A01H6/82
• 代理公司: 北京匯澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11228
• 代理人: 武君

1.顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因，其特征在于：所述顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因，其特征在于：所述顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.含有權(quán)利要求1所述顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因的重組植物表達(dá)載體，其特征在于：所述重組植物表達(dá)載體由 SEQ ID NO.3所示核苷酸序列連入pBI121載體的BamH1和Sac1酶切位點(diǎn)處制得。

4.權(quán)利要求1～2任一項(xiàng)所述顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因或權(quán)利要求3所述重 組植物表達(dá)載體在提高顛茄生物堿含量中的應(yīng)用，其特征在于：所述生物堿為東莨菪堿。

5.一種提高顛茄生物堿含量的方法，其特征在于，包括如下步驟：通過(guò)在顛茄中過(guò)量表達(dá)顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因，所述顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述生物堿為東莨菪堿。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述提高顛茄生物堿含量的方法，其特征在于，在顛茄中過(guò)量表達(dá)顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因的方法如下：克隆顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因，然后構(gòu)建植物表達(dá)載體，獲得含有顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因的重組植物表達(dá)載體，再將獲得的重組植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化發(fā)根農(nóng)桿菌獲得工程菌，最后用工程菌轉(zhuǎn)化顛茄，篩選顛茄毛狀發(fā)根，擴(kuò)大培養(yǎng)，PCR篩選陽(yáng)性植株，獲得生物堿含量提高的顛茄毛狀發(fā)根。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述提高顛茄生物堿含量的方法，其特征在于，克隆顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因的方法為：以顛茄cDNA為模板，SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，電泳檢測(cè)，回收，獲得顛茄WRKY類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子基因。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述提高顛茄生物堿含量的方法，其特征在于，所述重組植物表達(dá)載體為將SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列連入pBI121載體BamH1和Sac1酶切位點(diǎn)處而得。