[發明專利]一種基于三嗪環結構限定性N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉抗原、抗體及應用

有效

• 申請號: 201711308738.4
• 申請日: 2017-12-11
• 公開（公告）號: CN108059622B
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 沈玉棟;鄒婷婷;楊金易;徐振林;王弘;肖治理;羅林;雷紅濤;孫遠明
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C07D251/18
• 分類號: C07D251/18;C07K14/77;C07K14/765;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.一種N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉半抗原，其特征在于，結構如式I所示：

其中R為-H和-CH3。

2.一種權利要求1所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉半抗原的制備方法，其特征在于，方法如（1）或（2）：

（1）包括以下步驟：在碳酸鉀存在下，先將N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉鹽酸鹽解離出鹽酸以制備N-(2-胍基-亞胺甲基)-嗎啉a，再與甲醇鈉/甲酸乙酯反應得到N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉半抗原Ia，其反應式為：

（2）包括以下步驟：在甲醇鈉存在下，先將N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉鹽酸鹽解離出鹽酸以制備N-(2-胍基-亞胺甲基)-嗎啉a，再與乙酸乙酯反應得N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉半抗原Ib，其反應式為：

。

3.權利要求1所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉半抗原在制備N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉人工抗原方面的應用。

4.一種N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉人工抗原，其特征在于，是由權利要求1所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉半抗原與載體蛋白偶聯得到。

5.根據權利要求4所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉人工抗原，其特征在于，所述載體蛋白為牛血清蛋白或卵清蛋白。

6.根據權利要求4所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉人工抗原，其特征在于，采用戊二醛法制備，具體步驟包括：將權利要求1所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉半抗原溶于PBS緩沖溶液，與含有10 mg/mL載體蛋白的PBS緩沖溶液混合，攪拌過程中逐滴加入適量的2.5%的戊二醛水溶液，室溫避光反應3h，4℃用PBS透析2天，每天更換透析液3次，得到N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉人工抗原，分裝，并低溫保存備用；所述的N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉半抗原與載體蛋白的的摩爾比為40-100:1。

7.權利要求4所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉人工抗原在制備抗N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉多克隆抗體、單克隆抗體或基因工程抗體方面的應用。

8.一種N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉抗體，其特征在于，以權利要求4所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉人工抗原制備得到。

9.權利要求8所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉抗體在免疫法檢測N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉中的應用。

10.一種直接檢測N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉的快速免疫分析方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將權利要求4所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉人工抗原作為免疫原免疫動物制備抗N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉多克隆抗體；

（2）將權利要求4所述N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉人工抗原作為包被原包被在微孔板上，將上步制備得到的抗N-(2-胍基-乙亞氨基)-嗎啉多克隆抗體加入微孔板中；

（3）采用間接競爭ELISA方法檢測抗血清效價。