[發明專利]豬細小病毒結構蛋白抗體酶聯免疫檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201711297706.9
• 申請日: 2017-12-08
• 公開（公告）號: CN107991499B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 向王震;肖進;董春娜;王飛;李玲;張蕾;張國棟;李靜;張欣;張曉戰;齊鵬
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/015
• 分類號: C07K14/015;G01N33/68
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳;李巍

本發明公開了一種豬細小病毒結構蛋白抗體酶聯免疫檢測試劑盒。該試劑盒包括酶標板、陽性對照血清、陰性對照血清和酶標二抗，其中所述酶標板包被有豬細小病毒結構蛋白抗原表位多肽組合物。該抗原表位多肽組合物為序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2、序列表中序列3所示的多肽或序列表中序列4所示的多肽中的一種或兩種以上的任意組合。本試劑盒使用化學合成抗原肽包被酶標板，抗原用量少、靈敏性和特異性高，可以高效地檢測是否存在豬細小病毒的結構蛋白抗體。本發明試劑盒敏感性高、特異性好、且操作便捷，具有良好的市場前景。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，更具體地，本發明涉及一種豬細小病毒結構蛋白抗體酶聯免疫檢測試劑盒。

背景技術

豬細小病毒(Porcine parvovirusVirus,PPV)是造成母豬繁殖障礙的重要病原之一。PPV感染豬群后，對成年豬引起癥狀較輕,但對不同孕期的母豬感染后會造成死胎、木乃伊胎和流產等不同臨床癥狀。病原體感染機體后會導致慢性持續性感染，并不斷向周圍環境排毒，養殖場的PPV感染陽性率很高。在不同國家和地區,其報道的血清陽性率為40.7％-99.6％，我國不同地區血清陽性率為50.1％-98％之間。若預防控制不當，該病能在同一養殖區域連續發生幾年甚至十幾年的流行，造成繁殖失敗，給養豬業帶來較大的經濟損失。

PVV是細小病毒科(Parvoviridae)細小病毒屬(Parvovirus)的成員，病毒粒子呈圓形或六邊形，無囊膜，為直徑約20nm的單鏈DNA病毒。病毒基因組大約長5kb，包含多于兩個開放閱讀框，靠近5’端的開放閱讀框主要編碼非結構蛋白NS1、NS2和NS3，這些非結構蛋白主要參與病毒的復制。靠近3’端的開放閱讀框編碼結構蛋白VP1、VP2和VP3，分子量大小分別為84kd、64kd和60kd。衣殼蛋白由VP1、VP2和VP3組成，其中主要的衣殼蛋白為VP2，其對PPV的嗜性和毒力強弱影響很大。

豬細小病毒在我國各養殖場檢測的血清陽性率較高，對該病的血清學診斷方法中，血清中和試驗、血凝抑制試驗、酶聯免疫吸附試驗、瓊脂擴散試驗等是常用的檢驗方法，其中血凝抑制試驗和酶聯免疫吸附試驗最為常用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測豬細小病毒結構蛋白抗體的間接ELISA檢測試劑盒，該試劑盒利用豬細小病毒結構蛋白VP1、VP2和VP3抗原表位多肽作為包被抗原，建立了一種特異性、敏感性和重復性好的間接ELISA方法，用于檢測豬血清中是否含有豬細小病毒結構蛋白抗體。

為了達到上述目的，本發明首先篩選得到了性能優異的豬細小病毒抗原表位多肽組合物，本發明提供的豬細小病毒結構蛋白抗原表位多肽組合物，為序列表中序列1所示的多肽、序列表中序列2、序列表中序列3所示的多肽或序列表中序列4所示的多肽中的一種或兩種以上的任意組合。當所述多肽組合物為序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽中的兩種時，兩種多肽的質量比為(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；優選的，它們的質量比為1：1；當所述多肽組合物為序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽中的三種時，任意三種多肽的質量比為(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；優選的，它們的質量比為1：1：1；

當所述多肽組合物由序列1所示的多肽、序列2所示的多肽、序列3所示的多肽和序列4所示的多肽組成時，它們的質量比為(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；優選的，它們的質量比為1：1：1：1。

本發明的豬細小病毒結構蛋白抗體酶聯免疫檢測試劑盒，包括酶聯反應板、陽性對照血清、陰性對照血清和酶標二抗，其中所述酶聯反應板包被有豬細小病毒結構蛋白抗原表位多肽組合物。

所述酶聯反應板為可拆卸96孔酶標板；所述豬細小病毒結構蛋白抗原表位多肽組合物中的多肽均為化學人工合成得到。