[發明專利]一種黑曲霉種子培養及其制備檸檬酸的方法

有效

• 申請號: 201711293931.5
• 申請日: 2017-12-08
• 公開（公告）號: CN107815421B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 石貴陽;劉龍;陳堅;胡志杰;蔣建偉;蔣小東;金賽;孫福新;李由然;周東姣
• 申請（專利權）人: 江蘇國信協聯能源有限公司;江南大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/48;C12R1/685
• 代理公司: 無錫華源專利商標事務所(普通合伙) 32228
• 代理人: 聶啟新

1.一種通過培養黑曲霉種子制備檸檬酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)取培養成熟的黑曲霉麩曲孢子，加入5～10倍體積的無菌水，震蕩浸泡0.5～12h，用四層紗布過濾，得到分散孢子懸液；

(2)將步驟(1)中的分散孢子懸液接入稀糖液中，在溫度為30～42℃，pH為3.5～6.0，攪拌轉速為0～100rpm的條件下，培養4～10h，得到發芽孢子；所述稀糖液中含有麩皮或淀粉渣顆粒物質，使得固形物含量為10～100g/L，另外，稀糖液中添加體積百分比為0.05～0.1％的吐溫80；

(3)培養結束后，將攪拌轉速提高至200～1000rpm，攪拌0.5～2h，將聚集的發芽孢子重新分散；

(4)將步驟(3)中分散的發芽孢子，轉接至種子罐內，在溫度為35～39℃，風量為0.2～0.6vvm，罐壓為0.05～0.1Mpa，攪拌轉速為100～200rpm的條件下，培養10～16h，得到成熟種子液；

(5)將步驟(4)中成熟種子液轉至發酵罐內培養，還原糖低于5g/L停止發酵，得到檸檬酸發酵液；

步驟(2)中所述孢子懸液接入的終濃度為3* 10⁹～6*10⁹個/mL；

步驟(2)中所述稀糖液是由玉米液化液經過板框過濾得到糖液，再將糖液稀釋至總糖濃度5～20g/L；121℃滅菌15min，冷卻至39℃獲得。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述顆粒物質采用發酵行業其他含有纖維、淀粉或蛋白的顆粒物質替代。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中所述種子罐內種子培養基為：采用玉米液化液和硫酸銨配制，總糖濃度100～160g/L，氮源濃度為2～3g/L，121℃滅菌15min，冷卻至39℃。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)中所述發酵罐內發酵培養基為：采用玉米液化液和糖液配制，總糖濃度160～170g/L，氮源濃度為0.9～1.2g/L，90℃滅菌25min，冷卻至37℃。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述發酵培養基還添加小麥淀粉乳或木薯液化液。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)中的發酵培養條件為：培養溫度35～39℃，風量為0.1～0.4vvm，罐壓0.05～0.1Mpa，攪拌轉速100～200rpmin。