[發(fā)明專利]一種提高尿促性素效價(jià)的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711293332.3
• 申請(qǐng)日: 2017-12-08
• 公開（公告）號(hào): CN109897095A
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉乃山;夏襯來(lái);于曉娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島康原藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/59
• 分類號(hào): C07K14/59;C07K1/20;C07K1/18
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• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開了一種利用層析技術(shù)純化尿促性素的方法。具體的說(shuō)，就是運(yùn)用親和層析和離子交換層析純化低效價(jià)尿促性素，將效價(jià)約為30iu/mg的尿促性素效價(jià)提高到約600iu/mg,并且各項(xiàng)指標(biāo)均符合中國(guó)藥典規(guī)定。本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，產(chǎn)品純度高，更能滿足臨床和科研的需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及一種應(yīng)用層析法來(lái)制備效價(jià)高、收率穩(wěn)定的尿促性素的方法。

背景技術(shù)

尿促性素（HMG）是由人腦下垂體前葉部分分泌的一種糖蛋白促性腺激素，一般是從絕經(jīng)期或絕經(jīng)期后婦女的尿液中經(jīng)提取純化而制得。HMG 含有卵泡刺激素（FSH）和黃體生成素（LH），其所含比例近似1 ：1。臨床主要用于治療婦女因功能性不排卵所致的不育癥；男性因激素水平低下所引起的精子過(guò)少或活力不足。另外，還用于治療諸如婦女閉經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、男女之性機(jī)能失調(diào)等癥。

1928 年Ascbheim 首先報(bào)道了從更年期婦女尿液中發(fā)現(xiàn)了活性物質(zhì)，之后報(bào)道雖不少，但真正對(duì)HMG 的了解和制備，是從20 世紀(jì)60 年代的Donimi 開始，并逐漸形成比較規(guī)范化的工藝來(lái)制備的。我國(guó)從20 世紀(jì)70 年代開始研究，80 年代正式進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，90年代開始大量生產(chǎn)。

目前，比較經(jīng)典的制備工藝是高嶺土- 乙醇法制備HMG 粗制品，再用各種純化方法進(jìn)行純化。國(guó)內(nèi)目前常用的純化方法收率偏低（一般小于50%），成品效價(jià)在100iu/mg 左右。中國(guó)專利CN101792482A 介紹了“一種促性腺激素的純化方法”，該方法采用硅酸鋁粉末作為吸附劑提取純化HMG，但其效價(jià)僅能達(dá)到150iu/mg。

在實(shí)際生產(chǎn)中，選用層析法純化尿促性素,可以更有效的去除其中的多種雜蛋白，并且使其理化性質(zhì)和生物活性保持穩(wěn)定，從而使產(chǎn)品的各項(xiàng)指標(biāo)均符合中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)。更重要的是，通過(guò)工藝的不斷改進(jìn)和完善，使得尿促性素效價(jià)不低于600iu/mg，帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種層析純化尿促性素的方法，使尿促性素效價(jià)可穩(wěn)定達(dá)到600iu/mg 以上。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：低效價(jià)尿促性素經(jīng)產(chǎn)品溶解、親和層析、離子交換層析后得到高效價(jià)尿促性素，包括如下步驟：

（1）尿促性素粗品用含pH 6.0~8.0的含0.1~0.3mol/L NaCl、0.01~0.03 mol/L EDTA的Tris-HCl緩沖液溶解，離心去沉淀，得上清液；

（2）親和層析：用pH 6.0~8.0含0.1~0.3mol/L NaCl Tris-HCl緩沖液平衡Argmatin-Sepharose柱，上清液上柱后， 用pH 6.0~8.0含0.1~0.3mol/L NaCl、0.1~0.3mol/L鹽酸胍的Tris-HCl緩沖液洗脫，洗脫液經(jīng)超濾脫鹽至無(wú)氯離子，加NaCl和1mol/L Tris-HCl稀釋至pH 7.0~9.0含0.05~0.30mol/L NaCl的Tris-HCl緩沖液；

（3）離子交換層析：將上述緩沖液上樣于DEAE-Sepharose Fast Flow柱，用pH 6.0~8.0含0.01~0.20mol/L NaCl 的Tris-HCl平衡液沖洗，換用pH 6.0~8.0含0.1~0.3mol/L NaCl的Tris-HCl緩沖液洗脫。

（4）紫外檢測(cè)，收集酶活性部分，超濾濃縮后冷凍干燥，即得成品；

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于實(shí)施例表述的范圍。

實(shí)施例1

（1）預(yù)處理：取尿促性素粗品按重量1:15（w/v）比例加入pH 7.0的含0.2mol/L NaCl、0.02mol/L EDTA 的Tris-HCl緩沖液溶解，離心去沉淀，得上清液；