[發明專利]一種糖苷鍵質譜碎裂型化學交聯劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201711290341.7
• 申請日: 2017-12-08
• 公開（公告）號: CN109897078B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 張麗華;高航;趙群;趙麗麗;江波;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C07H15/26
• 分類號: C07H15/26;C07H15/04;C07H13/04;C07H1/00;G01N33/68
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種糖苷鍵質譜碎裂型化學交聯劑的制備方法，其特征在于：

步驟一，以海藻糖為起始原料，在堿性條件下，兩個伯羥基與溴乙酸反應，制備海藻糖二羧酸；

步驟二，以海藻糖二羧酸為原料，以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（簡稱EDCI）為縮合劑，與N-羥基琥珀酰亞胺（簡稱NHS）發生酯化反應，即制得海藻糖交聯劑；

具體步驟如下：

。

2.一種糖苷鍵質譜碎裂型化學交聯劑的制備方法，其特征在于：

步驟一，二糖的全乙酰化，在乙酸酐/吡啶體系中，制備全乙酰二糖；

步驟二，全乙酰二糖在路易斯酸作用下，與含羥基的富集試劑反應，在乙酰二糖1號位引入富集基團，制備修飾富集基團的乙酰二糖；

步驟三，修飾富集基團的乙酰二糖在堿性條件中去乙酰化，制備修飾富集基團的二糖；

步驟四，修飾富集基團的二糖在四甲基哌啶氮氧化物（簡稱TEMPO）/次氯酸鈉氧化體系下，將二糖兩個伯羥基氧化成二羧基，制備修飾富集基團的二糖二羧酸；

步驟五，修飾富集基團的二糖二羧酸為原料，以EDCI為縮合劑，與NHS發生酯化反應，即制得修飾富集基團的二糖交聯劑；

具體步驟如下：

其中

中的一種；

二糖為麥芽糖、纖維二糖及乳糖中的一種。

3.根據權利要求1所述的制備方法，特征在于：

步驟一中將海藻糖溶于異丙醇中，加入氫氧化鈉固體，海藻糖與氫氧化鈉摩爾比控制在1：5-10，溫度控制在40-60 ℃攪拌0.5-1 h；隨后稱取溴乙酸，海藻糖與溴乙酸摩爾比控制在1：2.0-3.0，分批次加入反應體系，繼續反應5-10 h，溫度控制在40-60 ℃，停止反應，室溫過濾并用甲醇淋洗，真空干燥6-12 h，即制得海藻糖二羧酸；

步驟二中將海藻糖二羧酸溶于二甲基亞砜中，依次加入NHS、EDCI，三者摩爾比控制在1：(3.0-4.0)：(3.0-4.0)，室溫攪拌12-24 h；反應完畢，利用半制備反相色譜分離純化，即制得海藻糖交聯劑。

4.根據權利要求2所述的制備方法，特征在于：

步驟一中將二糖加入無水吡啶中，升溫至微回流，使二糖全部溶解；恢復室溫，滴加乙酸酐，控制乙酸酐與二糖摩爾比大于10：1；滴畢，室溫反應12-24 h；反應完畢，除去溶劑及過量的乙酸酐，底物溶于二氯甲烷；有機相分別用飽和碳酸氫鈉及飽和食鹽水洗二次；有機相加入無水硫酸鈉干燥，除去溶劑，粗品以二氯甲烷、石油醚混合液為流動相，通過柱色譜進一步純化，即制得全乙酰二糖；

步驟二中將全乙酰二糖與含有羥基的富集試劑溶于二氯甲烷并降溫至0℃，緩慢滴加三氟化硼乙醚溶液；全乙酰二糖、富集試劑與三氟化硼摩爾比控制在1:(3-10): (3-10)；滴畢，恢復室溫反應過夜；反應液加入三乙胺中和過量的路易斯酸，有機相依次用飽和碳酸氫鈉及飽和食鹽水洗兩遍，并用無水硫酸鈉干燥；有機相除去溶劑，得到粗產物；以正己烷、二氯甲烷混合液為流動相，通過柱色譜進一步純化，即制得修飾富集基團的乙酰二糖。

5.根據權利要求2所述的制備方法，特征在于：步驟三中將修飾富集基團的乙酰二糖溶于體積比為1：1四氫呋喃/甲醇中；稱取相對于乙酰二糖的10-15當量的甲醇鈉固體溶于甲醇中，室溫條件緩慢加入反應液，繼續反應2-5 h；反應完畢，滴加稀鹽酸調pH值至中性；除去溶劑，粗品以氯仿、甲醇混合液為流動相，通過柱色譜進一步純化，即制得修飾富集基團的二糖。