[發(fā)明專(zhuān)利]一種測(cè)定生防細(xì)菌代謝產(chǎn)物拮抗活性的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711283639.5
• 申請(qǐng)日: 2017-12-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107937479B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪軍;黃俊生;梁昌聰;周游;劉磊;楊臘英;郭立佳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/18
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/18
• 代理公司: 廣州三環(huán)專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 陳歡

1.一種測(cè)定生防細(xì)菌代謝產(chǎn)物拮抗活性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備含有細(xì)菌抑制劑的植物病原真菌或生防真菌孢子懸浮液：分別取植物病原真菌或生防真菌的孢子懸浮液，添加至少一種細(xì)菌抑制劑，即獲得含有細(xì)菌抑制劑的植物病原真菌或生防真菌孢子懸浮液；

2)制備含有細(xì)菌抑制劑的生防細(xì)菌發(fā)酵液：取生防細(xì)菌發(fā)酵液，添加至少一種細(xì)菌抑制劑，即獲得含有細(xì)菌抑制劑的生防細(xì)菌發(fā)酵液；

3)共培養(yǎng)：

(1)取含有細(xì)菌抑制劑的植物病原真菌或生防真菌孢子懸浮液，加入熔化狀態(tài)的培養(yǎng)基，混勻后倒入培養(yǎng)皿，培養(yǎng)基凝固后進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，然后用打孔器在距離培養(yǎng)皿中心位置等距離打孔；

(2)取含有細(xì)菌抑制劑的生防細(xì)菌發(fā)酵液加入步驟(1)中打出的孔內(nèi)，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)；

4)抑菌圈測(cè)定：待病原菌生長(zhǎng)2-3d后測(cè)量培養(yǎng)基上孔周?chē)囊志χ睆?，觀察抑菌圈透明程度；

細(xì)菌抑制劑的添加量不低于10μg/mL，共培養(yǎng)步驟中每孔加入不低于10μL的含有細(xì)菌抑制劑的生防細(xì)菌發(fā)酵液；

所述步驟1)中的植物病原真菌或生防真菌孢子懸浮液濃度不低于2.2×10⁷個(gè)/mL；

所述植物病原真菌包括膠孢炭疽菌和辣椒疫霉；所述生防真菌包括淡紫擬青霉和綠色木霉；所述生防細(xì)菌包括芽孢桿菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定生防細(xì)菌代謝產(chǎn)物拮抗活性的方法,其特征在于，適合植物病原真菌或生防真菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基包括常規(guī)的PDA或CA培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定生防細(xì)菌代謝產(chǎn)物拮抗活性的方法,其特征在于，適合生防細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基包括常規(guī)的NA或LB培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定生防細(xì)菌代謝產(chǎn)物拮抗活性的方法,其特征在于，所述的打孔器包括直徑為6mm的打孔器。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定生防細(xì)菌代謝產(chǎn)物拮抗活性的方法,其特征在于，步驟3)中每孔加入等體積的含有細(xì)菌抑制劑的生防細(xì)菌發(fā)酵液。