[發(fā)明專利]一種利用松蘿檢測(cè)放射性氣體氡對(duì)植物DNA損傷的評(píng)價(jià)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711276202.9
• 申請(qǐng)日: 2017-12-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108061749B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭桂靈;李鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/447
• 分類號(hào): G01N27/447;G01N1/34;G01N1/28
• 代理公司: 青島中天匯智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37241
• 代理人: 袁曉玲;萬(wàn)桂斌

1.一種利用松蘿檢測(cè)放射性氣體氡對(duì)植物DNA損傷的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，將松蘿置于氡室中，置氡完成后提取細(xì)胞核，再進(jìn)行單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，采用CASP系統(tǒng)，測(cè)量DNA遷移的參數(shù)，評(píng)價(jià)DNA的損傷程度，所述提取細(xì)胞核的具體步驟為：

①預(yù)處理：去掉松蘿的根及莖葉表面鱗片,用透明膠帶粘附松蘿葉片的上表面和下表面5-6次，去除其葉表鱗片；

②研磨：松蘿莖、葉用雙蒸水沖洗、放入預(yù)冷的研缽中，快速研磨至碎，并勻漿；

③去雜質(zhì)：用預(yù)冷的解剖針挑取勻漿中的雜質(zhì)出來(lái)，再用提取液提取；

④提取分離：加入2％纖維素酶和果膠酶混合液，混勻后于4℃靜置2h，梯度離心收獲；

⑤洗滌備用：用磷酸緩沖液重復(fù)洗滌細(xì)胞2次，將細(xì)胞懸于磷酸緩沖液中，置4℃冰箱，備用;

所述單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)包括以下步驟：

①鋪膠：0.75％瓊脂糖凝膠煮沸后取100μl迅速均勻鋪于微電泳槽內(nèi)，置于4℃冰箱1min使凝膠固化，取制好的細(xì)胞懸液25μl與75μl 0.75％低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠混勻后均勻鋪于第一層凝膠上面，置于4℃冰箱固化1min；

②裂解：將微電泳槽置于新鮮配制的堿性裂解液中，4℃冰箱中裂解2h，所述堿性裂解液含有2.5mol·L-1NaCl、0.1mol·L-1EDTA、10mol·L-1Tris-HCl、1％Na-lauroylsarcosine，其pH值為10；

③電泳：裂解后取出微電泳槽，用雙蒸水漂洗去掉多余的鹽分，置于提前加入4℃堿性電泳液的水平電泳儀中靜置20min，然后在20V，200mA電泳條件下電泳20min；

④染色和觀察：2μg/ml溴化乙錠染色，雙蒸水漂洗，去掉多余染液，先在熒光顯微鏡低倍鏡下觀察彗星細(xì)胞，然后在高倍鏡下，用圖像采集系統(tǒng)隨機(jī)抓取彗星細(xì)胞圖像。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，抓取的彗星細(xì)胞圖像采用CASP系統(tǒng)自動(dòng)分析，測(cè)量DNA遷移的參數(shù)，評(píng)價(jià)DNA的損傷程度。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，表征DNA的損傷程度的參數(shù)包括拖尾。